中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2021年第06期

• 丝氨酸蛋白酶抑制剂E2通过激活β-catenin促进食管鳞癌细胞迁移和侵袭

  张江兰,骆爱萍,黄福荣,巩彤阳,刘芝华

  目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂E2(SERPINE2)在食管鳞癌细胞迁移和侵袭中的作用及相关分子机制。方法 运用TCGA(http：//gepia.cancer-pku.cn/detail.php和http：//ualcan.path.uab.edu/index.html)数据库对SERPINE2在食管癌中的表达进行分析。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常食管上皮细胞NE2、食管鳞癌细胞KYSE30和KYSE150中SERPINE2 mRNA的表达。在KYSE30细胞中转染SERPINE2敲降或过表达质粒，以qRT-PCR法检测表达效果。采用体外迁移侵袭实验分析SERPINE2与食管鳞癌细胞迁移和侵袭的关系。采用免疫荧光、qRT-PCR和Western blot等实验检测SERPINE2与β-catenin和靶基因c-Myc、cyclin D1和CD44表达的相关性。结果 数据库中182例和95例食管癌和食管鳞癌组织样本中，SERPINE2 mRNA在食管癌和食管鳞癌组织中表达均增高( <0.05)；SERPINE2在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中均呈高水平表达( <0.01)。对照组细胞的迁移和侵袭数分别为(212.66±24.11)个/视野和(136.00±14.42)个/视野，SERPINE2敲降组1细胞的迁移和侵袭数分别为(88.33±9.71)个/视野和(77.00±9.53)个/视野，SERPINE2敲降组2细胞的迁移和侵袭数分别为(66.00±8.00)个/视野和(45.66±3.78)个/视野，与对照组相比，差异均有统计学意义(均 <0.01)。对照组细胞的迁移和侵袭数分别为(250.00±30.00)个/视野和(203.33±15.27)个/视野，SERPINE2过表达组细胞的迁移和侵袭数分别为(383.33±35.11)个/视野和(246.66±25.16)个/视野，与对照组比较，差异均有统计学意义(均 <0.01)。SERPINE2过表达组细胞中β-catenin表达上调，p-β-catenin表达下调，β-catenin转录活性增强，c-Myc、cyclin D1和CD44 mRNA表达上调。在对照组和SERPINE2过表达组细胞培养基中分别加入iCRT14后，对照组和SERPINE2过表达组细胞的迁移数分别为(200.00±36.05)个/视野和(258.33±22.54)个/视野，侵袭数分别为(160.00±17.32)个/视野和(188.33±25.65)个/视野，与未加入iCRT14组比较，差异均有统计学意义(均 <0.01)。 结论 SERPINE2在食管鳞癌细胞中表达增高，通过激活β-catenin在促进食管鳞癌细胞迁移和侵袭中发挥重要的作用。

• CRL4B复合物抑制分泌型卷曲相关蛋白1促进胰腺癌的发生发展

  陈旸,冷帅,王艳

  目的 探讨CRL4B复合物在胰腺癌发生发展中的作用及其分子机制。方法 将胰腺癌细胞分为对照组(转染阴性对照慢病毒)、shCUL4B组(转染CUL4B慢病毒)、shDDB1组[转染DNA损伤结合蛋白1(DDB1)慢病毒]和shCUL4B+siSFRP1组[转染CUL4B慢病毒+分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)-siRNA]。对敲低CUL4B和DDB1的胰腺癌细胞系进行RNA测序(RNA-seq)，寻找CRL4B复合物调控的靶基因，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测靶基因mRNA的表达，染色质免疫共沉淀(ChIP)-PCR实验鉴定CRL4B复合物直接调控的靶基因，Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白的表达水平，EdU细胞增殖实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用GEO、TCGA和GTEx数据库中胰腺癌相关肿瘤样本和正常组织样本的测序数据，分析CUL4B、DDB1和其下游靶基因的表达相关性。结果 RNA-seq结果显示，CRL4B复合物调控的靶基因涉及多种恶性肿瘤相关信号通路。qRT-PCR检测结果显示，shCUL4B和shDDB1组待验证靶基因的mRNA表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(均 <0.05)。ChIP-PCR实验结果显示，CRL4B复合物直接结合在NME1和SFRP1靶基因启动子区，敲低CUL4B的表达后，靶基因启动子区域组蛋白H2A第119位赖氨酸单泛素化富集减少。对照组PANC-1细胞增殖率为(32.10±3.58)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(13.95±1.66)%和(22.38±0.77)%，均 <0.05]；对照组AsPC-1细胞增殖率为(35.47±7.80)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(19.60±3.58)%和(30.09±0.81)%，均 <0.05]。细胞划痕实验显示，对照组PANC-1细胞迁移率为(53.18±3.70)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(17.46±2.62)%和(44.99±9.18)%，均 <0.05]。Western blot结果显示，对照组细胞上皮标志物α-catenin和γ-catenin的表达分别为1.00±0.03和1.01±0.11)，低于shCUL4B组(分别为1.44±0.01和1.21±0.06，均 <0.05)，对照组细胞间充质标志物Fibronectin和Vimentin表达水平分别为1.01±0.14和1.02±0.18，高于shCUL4B+siSFRP1组(分别为1.53±0.13和1.22±0.07，均 <0.05)。对照组细胞的迁移率为(100.00±3.96)%，与shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(35.49±0.34)%和(107.06±2.77)%]比较，差异均有统计学意义(均 <0.05)。CUL4B和DDB1在胰腺癌中表达升高，且与SFRP1的表达呈负相关( 分别为-0.342和-0.264)。 结论 胰腺癌中CRL4B复合物转录抑制靶基因SFRP1进而促进胰腺癌的发生发展，且CRL4B复合物在胰腺癌中的高表达支持了其作为胰腺癌治疗的潜在靶点。

• 靶向CS1的第四代嵌合抗原受体T细胞治疗难治或复发性多发性骨髓瘤的初步研究

  冯都都,陈新华,郭晶晶,王可可,张校曼,高基民

  目的 分析在第二代嵌合抗原受体(CAR)的基础上设计的同时分泌白细胞介素7(IL7)和趋化因子19(CCL19)的第四代嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)，在多发性骨髓瘤微环境中增殖、趋化、清除肿瘤细胞和持久性等方面的能力。方法 通过2A自剪切肽技术构建第四代CAR载体质粒，采用第三代慢病毒包装系统制备高滴度慢病毒，通过流式细胞术检测慢病毒转导效率和CAR-T细胞亚型的变化；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CAR-T细胞中IL7和CCL19的分泌情况；手工计数法分析CAR-T细胞在培养过程中的增殖活性；Transwell迁移实验验证CAR-T细胞趋化能力；荧光素酶生物发光法检测CAR-T细胞特异性杀伤活性；小鼠异体移植模型验证CAR-T细胞体内抗骨髓瘤活性和安全性。结果 流式细胞术结果显示，抗CS1 CAR-T和抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞CAR的表达率分别为(91.50±0.29)%和(46.70±0.12)%，表明CAR-T细胞构建成功。亚型分析显示，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞中T记忆干细胞(TSCM)的比例为(67.58±0.59)%，高于抗CS1 CAR-T[(50.74±1.01)%， ＝0.000 1]，具有更强的免疫记忆功能，持久性更佳。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞较对照组(MOCK-T)和抗CS1 CAR-T组能够持续分泌IL7和CCL19( <0.000 1)。抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在慢病毒转导后的第9天细胞数达到(22.77±0.79)×10 个，高于抗CS1 CAR-T细胞[(9.40±0.79)×10 个， ＝0.000 1]，具有更强的增殖能力。Transwell迁移实验中，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞对于反应T细胞的趋化细胞数为(109.00±4.04)个/视野，高于对照组和抗CS1 CAR-T组[分别为(9.33±1.20)个/视野和(7.33±0.88)个/视野，均 <0.000 1]，具有更强的趋化能力。杀伤实验结果显示，与对照组细胞比较，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T和抗CS1 CAR-T均具有特异性的杀伤效能( <0.000 1)。动物实验表明，抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞降低了荷瘤小鼠的肿瘤负担( <0.000 1)，并延长了总生存时间( ＝0.006 1)。 结论 第四代抗CS1-IL7-CCL19 CAR-T细胞在不影响体内外抗骨髓瘤活性的情况下，有着更强的增殖活性、趋化能力和持久性，为克服传统CAR-T细胞存活率低下、持久性差以及受肿瘤微环境抑制等缺陷提供了策略，为第四代CAR-T细胞的临床应用提供了前期实验依据。

• 基于免疫相关基因的食管鳞癌预后风险评分模型的建立和验证

  刘航睿,姜国忠,辛道,杨亚蓝,樊青霞,孟祥瑞,李晟磊,刘杨,夏金,王峰

  目的 寻找准确预测食管鳞癌患者生存的生物标志物。方法 通过TCGA数据库筛选出与食管鳞癌患者总生存时间(OS)相关的免疫相关基因，构建预后风险评分模型。采用Kaplan-Meier法比较高风险和低风险组患者的预后情况，采用受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的准确性。收集安阳市肿瘤医院的83例病理诊断为食管鳞癌患者的肿瘤组织样本进行外部验证。采用Cox回归分析综合评估预后风险评分与各临床特征对食管鳞癌患者OS的影响。结果 从TCGA数据库筛选出7个与生存预后相关的免疫相关基因分别为S100A12、SLC40A1、FABP9、TNFSF10、IGHA2、IL1F10和STC2纳入预后风险评分模型。低风险组(40例)患者的1、2年生存率分别为94.3%和82.5%，高风险组(40例)患者的1、2年生存率分别为75.9%和32.9%；高风险组与低风险组患者比较，预后更差( 0.05)。 结论 S100A12、SLC40A1、FABP9、TNFSF10、IGHA2、IL1F10和STC2是与食管鳞癌患者OS相关的风险基因。预后风险评分是食管鳞癌患者OS的独立预后因素，与食管鳞癌组织中CD4 T淋巴细胞含量有关。

• 多原发性腹膜后脂肪肉瘤的治疗及预后

  苗成利,黄梅,陈小兵,刘世博,邹博远,罗成华

  目的 探讨多原发腹膜后脂肪肉瘤的手术治疗及其预后情况。方法 选取2017年5月至2019年12月于北京大学国际医院行腹膜肿瘤切除+腹膜后脂肪清扫的49例腹膜后脂肪肉瘤患者，收集患者的临床病理资料，分析腹膜后脂肪肉瘤的多原发情况及预后。结果 49例患者中，病理证实存在多个原发肿瘤(多发组)15例，非多个肿瘤(单发组)34例，多原发腹膜后脂肪肉瘤的发生率为30.6%(15/49)。高分化脂肪肉瘤和去分化脂肪肉瘤患者的疾病复发率分别为31.8%和44.4%，差异无统计学意义( >0.05)。多发组和单发组患者的疾病复发率分别为40.0%和38.2%，差异无统计学意义( >0.05)。全组49患者中，死亡5例。 结论 腹膜后脂肪肉瘤存在多原发性，行腹膜后脂肪切除术可使多原发患者的复发情况获益。

• 1 637例食管癌调强放射治疗的疗效和预后因素分析

  李晨,谭立君,刘晓,韩炜明,高麟芮,王诗嘉,周宗玫,冯勤付,陈东福,梁军,吕纪马,王文卿,惠周光,王绿化,王鑫,刘文扬,邓垒,王健仰,翟医蕊,张涛,毕楠,肖泽芬

  目的 分析调强放射治疗对食管癌患者预后的影响。方法 回顾性分析2005年1月至2017年12月中国医学科学院肿瘤医院收治的1 637例食管癌患者的临床和随访资料，分析全组患者的5年总生存率、5年无进展生存率以及复发模式，预后影响因素分析采用Log rank检验和Cox多因素回归分析。结果 全组患者的1、3、5年总生存率分别为65.9%、34.2%和27.0%，1、3、5年无进展生存率分别为45.8%、25.0%和18.5%。中位总生存时间为19.4个月(95% 为18.0～20.7个月)，中位无进展生存时间为10.4个月(95% 为9.3～11.3个月)。单因素分析结果显示，性别、卡氏体力状态评分(KPS)、肿瘤部位、T分期、N分期、M分期、TNM分期、放疗剂量和治疗模式与食管癌患者的5年总生存率和5年无进展生存率均有关(均 <0.05)。多因素分析结果显示，性别、KPS、TNM分期、放疗剂量和治疗模式是影响患者5年总生存率和5年无进展生存率的独立预后因素(均 <0.05)。 结论 食管癌患者接受调强放射治疗后，其生存率有明显提高。性别、KPS、TNM分期、放疗剂量和治疗模式是影响食管癌患者预后的独立因素。

• 调整食管癌新辅助化疗方案周期以应对特殊时期患者手术延迟的治疗策略探讨

  张默言,李勇,宋朋,秦建军,李印,高树庚

  目的 探讨调整食管癌新辅助化疗周期对患者手术的影响。方法 回顾性分析2019—2020年于中国医学科学院肿瘤医院就诊，调整新辅助化疗周期(多周期化疗组)和未调整化疗周期(对照组)的食管癌患者的临床病理资料，分析两组患者的临床病理特征及术后并发症。结果 多周期化疗组和对照组患者中，化疗与手术间隔时间>4周的患者分别为17和6例，差异有统计学意义( 0.05)。两组患者术后7 d和术后30 d均无死亡。多周期化疗组和对照组肿瘤退缩效果明显[肿瘤退缩分级(TRG)1、TRG2和TRG3级]分别为14和7例，效果不明显(TRG4级和TRG5级)分别为8和15例，差异有统计学意义( <0.05)。多周期新辅助化疗后，有患者影像学检查提示肿瘤几乎完全消退，术后病理提示无恶性肿瘤组织残留。 结论 局部晚期食管癌患者增加新辅助化疗周期，可以获得更明显的肿瘤退缩反应，可根据手术排期多次调整新辅助化疗周期。

• T1期高级别膀胱尿路上皮癌伴腺样分化患者预后分析

  王超,孙致强,刘明勇,张景军,刘刚,冯毅,严永峰,崔瀚文,李刚

  目的 探讨T1期高级别膀胱尿路上皮癌伴腺样分化患者的预后情况。方法 回顾性分析2006年1月至2019年2月天津市第五中心医院收治的208例T1期高级别膀胱癌患者的资料，其中伴腺样分化组78例，单纯尿路上皮癌组130例，比较两组患者的预后情况。伴腺样分化组男性62例，女性16例；年龄38～81岁，中位年龄67岁。单纯尿路上皮癌组男性105例，女性25例；年龄40～82岁，中位年龄66岁。采用Cox比例风险模型法进行单因素和多因素分析，Kaplan-Meier方法分析两组无复发生存率和无进展生存率。结果 伴腺样分化组复发51例(65.4%, 51/78)，进展22例(28.2%, 22/78)，复发率和进展率均明显高于单纯尿路上皮癌组[分别为38.5%(50/130)和14.6%(19/130),均 <0.05]。伴腺样分化组患者的中位复发时间为41个月，单纯尿路上皮癌组患者的中位复发时间为55个月。伴腺样分化组复发患者的中位进展时间为39个月，单纯尿路上皮癌组复发患者的中位进展时间为54个月。Cox单因素分析显示，肿瘤最大径( ＝0.030)、伴腺样分化( ＝0.003)和淋巴血管侵犯( ＝0.032)与膀胱尿路上皮癌患者的肿瘤复发有关。伴腺样分化( ＝0.036)和淋巴血管侵犯( ＝0.011)与膀胱尿路上皮癌患者的疾病进展有关。Cox多因素分析显示，伴腺样分化( ＝0.001)、淋巴血管侵犯( ＝0.038)是影响膀胱尿路上皮癌患者复发的独立因素。伴腺样分化( ＝0.007)和淋巴血管侵犯( ＝0.037)是影响膀胱尿路上皮癌患者进展的独立因素。 结论 T1期高级别膀胱尿路上皮癌伴腺样分化患者有更高的疾病复发和进展风险，此类患者应密切随访，根据具体情况行个体化综合治疗。

• 淋巴结内骨外骨肉瘤一例

  简薇,张燕华,张勇,李荣清

  null 患者男，48岁，因发现左侧腋窝约4 cm×3 cm大小包块，伴左胸壁疼痛，于当地医院行消炎治疗，包块未消退。2个月后行左腋窝包块切除术。术后病理示，左腋窝淋巴结内骨肉瘤。为排除转移性肿瘤，行PET-CT扫描，示左腋窝多发肿大淋巴结并点状钙化，考虑转移。双肺多发小结节，代谢不高。遂于我院病理会诊，考虑淋巴结内骨外骨肉瘤(extraskeletal osteosarcoma, ESOS)，并经病理会诊证实( )，淋巴结内见明显新骨和软骨形成。免疫组化染色显示，Vim(+)，S100(+)。患者术后左侧腋窝淋巴结残留，予左腋窝部放疗，放疗剂量至32 Gy(分16次完成)时出现左锁骨上窝淋巴结肿大，体检左锁骨上窝可及多枚淋巴结，大者约3.0 cm×1.5 cm，影像学考虑转移，余重要器官未见异常。遂给予患者左锁骨上和左侧腋窝放疗，总剂量60 Gy(分30次完成)。并同步环磷酰胺(1.5 g/m )+吡柔比星(50 mg/m )方案化疗3个周期。结束后1个月复查CT，提示双肺结节进展。左锁骨上淋巴结未完全消退。遂给予GP方案(吉西他滨+顺铂)+重组人血管内皮抑素治疗1个周期。患者出院后自服中药治疗。后电话随访，患者于末次化疗后3个月出现言语、神志不清，双下肢行走无力，影像学检查提示肺多发结节较前进展，并颅内多发病灶，后未行特殊治疗，患者死亡(自疾病诊断生存17个月)。