中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2021年第09期

• 钙周期素结合蛋白促进非小细胞肺癌增殖和侵袭

  许永杰,胡雨萌,秦朝,王飞,曹巍,余一雯,赵亮,李江,陈万青,李霓,赫捷

  目的 探讨钙周期素结合蛋白(CacyBP)对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法 选取2016年于济南市中心医院行手术治疗的非小细胞肺癌患的肺癌组织和正常癌旁组织标本各6例，采用Western blot法检测肺癌和正常癌旁组织中CacyBP蛋白的表达水平，Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常支气管上皮细胞16HBE和不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)中CacyBP蛋白和mRNA的表达水平。将siRNA、siCacyBP-1、siCacyBP-2、慢病毒包装质粒shNC和shCacyBP转染至A549细胞(分别记为siNC组、siCacyBP-1组、siCacyBP-2组、shNC组和shCacyBP组)，将对照质粒和Flag-CacyBP质粒转染至A549细胞(分别记为NC组和Flag-CacyBP组)。采用细胞计数试剂盒8法、平板克隆实验以及流式细胞术检测细胞增殖能力以及细胞周期情况，细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot法检测敲低或过表达CacyBP A549细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail1、Vimentin和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达。结果 CacyBP蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达水平为0.41±0.23，高于正常癌旁组织(0.11±0.04， <0.05)。不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)CacyBP蛋白的表达水平分别为0.35±0.01、0.38±0.01、0.32±0.01和0.41±0.01，均高于16HBE细胞(0.03±0.01，均 <0.05)；RT-PCR结果与Western blot结果一致。与siNC组[吸光度( )值为1.54±0.03]比较，siCacyBP-1组和siCacyBP-2组细胞增殖能力降低(分别为1.38±0.04和1.34±0.03，均 <0.05)。shNC组细胞克隆形成数为(41.33±3.21)个，高于shCacyBP组[(22.00±3.61)个， <0.05]。shCacyBP组细胞G 期占比为(61.35±5.45)%，高于shNC组[(49.61±1.54)%， <0.05]；S期占比为(25.41±3.21)%，低于shNC组[(38.68±0.46)%， <0.05]。shCacyBP组细胞迁移率为(12.67±0.71)%，低于shNC组[(35.50±2.07)%， <0.05]。shNC组细胞迁移和侵袭的数量分别为(406.33±7.37)个和(92.33±8.50)个，高于shCacyBP组[分别为(224.67±10.01)个和(66.00±7.94)个，均 <0.05]。与siNC组相比，敲低CacyBP的表达，E-cadherin的表达水平升高，N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平降低(均 <0.05)。与NC组相比，Flag-CacyBP组E-cadherin的表达水平降低，N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平升高(均 <0.05)，PI3K/Akt通路抑制剂LY294002可逆转上述结果。 结论 CacyBP通过调控Akt通路的活性促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。

• 长春新碱调控RAS相关结构域蛋白2A基因去甲基化抑制卵巢癌细胞增殖

  王文翔,范文强,高玉霞,董学彩,冯晓杰,任婕

  目的 探讨长春新碱调控RAS相关结构域蛋白2A(RASSF2A)去甲基化对卵巢癌细胞增殖的影响。方法 将卵巢癌SKOV3细胞分为不同浓度长春新碱组，将慢病毒转染至LV-NC组(转染LV-NC慢病毒液，感染复数为70)和LV-RASSF2A组(转染LV-RASSF2A慢病毒液，感染复数为70)SKOV3细胞，空白组加入等量磷酸盐缓冲液。采用CCK-8法检测6.25 nmol/L长春新碱组、12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组、50 nmol/L长春新碱组和100 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的活力，集落形成实验检测SKOV3细胞的增殖能力，流式细胞术检测SKOV3细胞的凋亡情况，逆转录聚合酶链反应检测人正常卵巢上皮细胞IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A mRNA的表达水平，Western blot检测IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A蛋白的表达水平，甲基化特异性聚合酶链反应检测IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A甲基化和去甲基化水平。结果 6.25 nmol/L长春新碱组、12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组、50 nmol/L长春新碱组和100 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的存活率分别为(87.19±4.49)%、(73.67±8.62)%、(66.35±6.04)%、(50.32±6.00)%和(34.92±6.11)%，均低于对照组[(100.46±4.69)%，均 <0.05]。培养48 h时，长春新碱半数抑制浓度为50.02 nmol/L。12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组和50 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的增殖率分别为(41.70±2.21)%、(32.15±1.80)%和(23.00±2.01)%，均低于对照组[(100.78±5.66)%，均 <0.05)]；SKOV3细胞的凋亡率分别为(3.65±0.27)%、(5.21±0.76)%和(10.46±1.00)%，均高于对照组[(2.12±0.23)%，均 <0.05)]。SKOV3细胞中RASSF2A mRNA和蛋白的表达水平分别为0.32±0.04和0.24±0.02，均低于IOSE-29细胞(分别为1.00±0.07和0.68±0.04，均 <0.05)。LV-RASSF2A组SKOV3细胞的存活率、增殖率和凋亡率分别为(68.92±3.94)%、(16.38±2.16)%和(8.65±0.56)%，与LV-NC组[分别为(101.60±4.39)%、(100.73±3.29)%和(4.06±0.30)%]比较，差异均有统计学意义(均 <0.05)。 结论 长春新碱通过上调RASSF2A的表达，促进RASSF2A启动子去甲基化，以抑制卵巢癌细胞的增殖能力。

• 正常免疫小鼠人源结肠癌移植瘤模型的建立

  程姝敏,刘建玲,谌通,毕研贞,刘昆燕,王全义,唐慧昕,杨永红,张小蓓,胡瑞瑞,刘素芹,张凯,孔令斌,郭道路,舒振锋,洪丰

  目的 探讨建立新型正常免疫小鼠人原代结肠癌移植瘤模型，为研究结肠癌在正常免疫情况下的发病机制提供可靠的实验动物模型。方法 人结肠癌细胞来自于2017年于济宁医学院附属医院接受手术治疗的结肠癌患者。细胞组小鼠接种含结肠癌细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)，微载体组接种含microcarrier 6的PBS，细胞-微载体复合物组接种含结肠癌细胞和microcarrier 6的复合物PBS。采用皮下注射方式将各组细胞接种于小鼠右腋皮下，记录肿瘤形成时间、大小、成瘤率及镜下病理学改变等。移植瘤组织采用EnVision二步法行免疫组化染色，根据视野中阳性细胞比例判断移植瘤成瘤效果，采用聚合酶链反应(PCR)法检测小鼠肿瘤组织中人特异性Alu序列的表达。结果 接种肿瘤细胞后，细胞组和微载体组小鼠均无死亡，均未成瘤；细胞-微载体复合物组小鼠在接种后第5~7天于右侧腋窝皮下可触及皮下肿瘤，成瘤率为67% (10/15)，接种后2~3周，肿瘤体积可达500 mm 左右。免疫组化结果示，CK20、CDX-2和癌胚抗原均为阳性表达。PCR结果显示，荷瘤小鼠移植瘤组织中可检测到人特异性Alu序列的表达。 结论 人原代结肠癌细胞以microcarrier 6为载体在正常免疫小鼠体内成瘤，成功地建立了新型正常免疫小鼠人源结肠癌移植瘤模型。

• 中性粒细胞淋巴细胞计数比值和血小板淋巴细胞计数比值与甲状腺微小乳头状癌中央区淋巴结转移的关系

  宋创业,孟艳林,刘冰,严丽,尚培中,贾志芳,姜永斌,孟繁玉

  目的 探讨中性粒细胞淋巴细胞计数比值(NLR)、血小板淋巴细胞计数比值(PLR)与cN0期甲状腺微小乳头状癌(PTMC)中央区淋巴结转移(CLNM)的关系。方法 收集2016—2019年解放军陆军第八十一集团军医院经手术治疗、病理证实为PTMC患者的临床病理资料，分析患者术前外周血NLR、PLR水平与术后PTMC CLNM的关系。多因素分析采用logistic回归分析，采用受试者工作特征(ROC)曲线确定NLR和PLR的临界值，采用交互作用相对超额危险度分析NLR、PLR与CLNM的关系。结果 220例cN0期PTMC患者中，CLNM 92例。ROC曲线显示，NLR临界值为2.5、PLR临界值为175时，Youden指数最高，分别为0.318和0.264。NLR和PLR与CLNM均有关(均 <0.05)，肿瘤长径、肿瘤多灶性、NLR≥2.5和PLR≥175为CLNM的独立影响因素(均 <0.05)。交互作用分析结果显示，交互作用相对超额危险度为5.531(95% 为0.160~10.901， ＝0.016)，归因比为0.512(95% 为0.230~0.794， ＝0.009)，协同指数为2.294(95% 为1.492~4.579， ＝0.022)，提示NLR、PLR有交互作用，二者协同促进CLNM。 结论 NLR和PLR为cN0期PTMC CLNM的独立危险因素，当NLR≥2.5、PLR≥175时，应常规行预防性中央区淋巴结清扫术。

• 180例原发性食管恶性黑色素瘤的临床病理特征

  孟辉,赵学科,宋昕,韩文莉,周胜理,孙莉,胡守佳,程让,王敏,尹玉慧,李宜真,丁一,王立东

  目的 探讨原发性食管恶性黑色素瘤(PMME)的临床病理特征和流行病学特征。方法 收集1973—2016年河南省食管癌重点开放实验室食管癌数据库中180例PMME患者的临床病理资料，其中男136例，年龄(58.5±9.0)岁；女44例，年龄(56.7±12.2)岁。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验，多因素分析采用Cox回归比例模型。结果 PMME的发病率为0.036%(180/50万)，大多为男性患者(男女比例约为3∶1)。PMME常见的发病部位为食管下段(48.9%，85/174)，其次为食管中段(46.0%，80/174)和食管上段(5.2%，9/174)。3例患者PMME细胞显微镜下未见黑色颗粒，且其免疫组化示Melan-A和HMB45呈强阳性。129例行术前食管活检的患者中，69例未被确诊为PMME(53.5%)。全组患者的中位生存时间为7.9个月，1、2、3和5年生存率分别为25.0%、7.9%、6.6%和1.3%。单因素分析显示，N分期、M分期、TNM分期和放疗与患者的总生存有关(均 <0.05)；多因素分析显示，TNM分期和放疗为患者总生存的独立影响因素(均 <0.05)。 结论 PMME多发于男性，常见发病部位为食管下段，中国人群PMME术前漏诊率较高；TNM分期和放疗为影响患者总生存的独立影响因素。

• 4例嗜酸性实性和囊性肾细胞癌临床病理特征

  李晓玲,蔡珊珊,张文娟,沈金辉

  目的 探讨嗜酸性实性和囊性肾细胞癌(ESC RCC)的临床病理特征和预后。方法 收集2017—2019年龙岩市第二医院、福建医科大学附属第二医院和漳州市医院诊治的4例ESC RCC患者的临床病理资料，采用免疫组化方法检测不同抗体的表达情况，探讨其诊断及鉴别诊断。结果 4例ESC RCC患者，男2例，女2例，年龄31~51岁，平均年龄40岁。肿瘤由实性区与大小不等的巨囊和微囊混合组成，囊腔衬覆具有丰富嗜酸性胞质的鞋钉样细胞；实性区呈弥漫片状、密集的腺泡状或巢状排列，局灶呈岛状、管状，混有少量的组织细胞和淋巴细胞。肿瘤细胞胞质丰富、嗜酸性，其内可见明显的细或粗颗粒，部分胞质内可见嗜酸性小球，部分区域可见胞质内空泡。免疫组化结果示，肿瘤细胞表达CK20(3/3，2例散在阳性，1例斑驳状强阳性)、Vimentin(4/4)，CD10散在细胞阳性(4/4)，Actin、HMB45、Melan-A、CD117和CK7均为阴性，Ki-67增殖指数约为1%。获得随访的2例患者无病生存时间分别为18和24个月。结论 ESC RCC具有独特的组织形态学表现，CK20(+)、CK7(-)有助于其诊断；ESC RCC具有共同的分子核型改变，支持其为独特的肿瘤实体。患者总体预后良好。

• 超微血管成像在肝脏局灶性病变中的应用价值

  杨凡,刘春伟,忻晓洁,张晟

  目的 探讨超微血管成像(SMI)对肝脏局灶性病变(FLLs)微血管特征的检测能力，分析血管指数(VI)、微血管密度(MVD)和Ki-67水平的关系。方法 收集2018年于天津医科大学肿瘤医院诊断为FLLs患者的影像学资料。166例FLLs患者分为非肝细胞癌(非HCC)组(96例)和HCC组(70例)。全组患者均行彩色多普勒血流成像(CDFI)和SMI检查，分析患者的Adler′s半定量分级(0~3级)和血管形态特征(a~f模式)，采用受试者工作特征(ROC)曲线评估SMI和CDFI血流特点对HCC的检测能力，采用Pearson相关分析评价HCC组患者VI与MVD的相关性，采用Spearman相关分析评价VI与Ki-67的相关性。结果 HCC组中，SMI检测出高级别血流(Adler′s半定量分级2~3级)50例，高于CDFI(22例， ＝0.033)。HCC组中，SMI检测出富血供模式(e、f模式)52例，高于CDFI(18例， <0.001)。非HCC组中，CDFI与SMI检测出血流特征差异无统计学意义( ＝0.537)。HCC组中SMI检测富血供模式52例，高于非HCC组(14例， <0.001)。以富血供模式作为HCC诊断标准时，SMI的ROC曲线下面积为0.760(灵敏度为74.3%，特异度为85.4%)，SMI富血供模式对HCC的诊断效果最佳。HCC组中，VI与MVD和Ki-67水平呈正相关( 分别为0.698和0.669，均 <0.05)。 结论 SMI对HCC微血管特征的检测能力优于CDFI，HCC较非HCC具有更多的富血供模式；在HCC中，VI与MVD和Ki-67表达水平呈正相关。

• 512例子宫内膜样腺癌微囊性伸长及碎片状浸润模式的临床病理特征及预后

  胡春芳,李丽红,李璐媛,杜强,张毅,王凯鹏,宋艳

  目的 探讨低级别子宫内膜样腺癌微囊性、伸长及碎片状(MELF)浸润模式与临床病理特征的关系及预后。方法 收集2010—2017年于中国医学科学院肿瘤医院确诊为子宫体原发低级别子宫内膜样腺癌的512例患者的临床病理资料，复阅病理切片评估是否伴MELF浸润模式，分析MELF浸润模式与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并行Log rank检验，多因素分析采用Cox比例风险回归模型和logistics回归分析。结果 MELF浸润模式在低级别子宫内膜样腺癌中的比例为12.9%(66/512)。MELF浸润模式与子宫间质侵犯、子宫肌层侵犯深度≥1/2、淋巴结转移和脉管瘤栓均有关(均 0.05)。 结论 子宫间质侵犯、子宫肌壁侵犯深度、淋巴结转移和脉管瘤栓与MELF浸润模式有关，MELF浸润模式为淋巴结转移的独立危险因素，是否伴MELF浸润并不影响子宫内膜样腺癌患者的预后。

• 骶前囊肿切除术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道的再次手术及围手术期处理方法的探讨

  张国强,王刚成,李红乐,古想花,刘瑞霞,丰锐,王有财,刘英俊,张志,王红丽

  目的 探讨骶前囊肿切除术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道再次手术及围手术期处理方法。方法 回顾性分析2014年1月至2019年8月郑州大学附属肿瘤医院收治的29例骶前囊肿切除术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道患者的临床资料，分析骶前囊肿切除术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道形成的特点、手术方式、围手术期的处理方法。结果 29例骶前囊肿切除术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道患者，表皮样囊肿9例，皮样囊肿7例，成熟畸胎瘤10例，囊肿癌变(包括尾肠囊肿癌变及畸胎瘤癌变)3例。29例患者外院手术入路均为后入路，其中1例联合经腹入路。全组患者接受再次骶前残留囊壁、窦道切除，其中25例为经会阴弧形切口入路，4例为经会阴弧形切口入路联合经腹入路。全组患者术后未出现严重并发症，术后病理及MRI显示残留囊壁均完整切除，窦道愈合。结论 合理的手术入路及围手术期处理对骶前囊肿术后囊壁残留并会阴部顽固性窦道患者的残留囊壁完整切除及会阴部窦道愈合尤为重要。

• 免疫检查点抑制剂相关超进展一例

  张静怡,彭艳梅,谭可欣,申文,张旭,孙晨耀,崔慧娟

  null 患者女，55岁，2014年10月出现尿频、尿急、尿痛，且症状不断加重，后出现血尿，查体可触及右侧腹股沟淋巴结肿大。2014年12月膀胱镜检查示，膀胱多发滤泡样肿物。2015年1月5日行膀胱肿物切除，术后病理示高级别浸润性尿路上皮癌。2015年1月14日行膀胱镜根治术+切除回肠膀胱再造术，术后病理示膀胱三角区高级别浸润性尿路上皮癌，肿瘤大小4 cm×4 cm×2 cm，侵及膀胱壁深肌层，脉管内见癌栓。周围淋巴结可见转移癌(2/2)，临床分期为pT2bN2M1a，ⅣA期。