中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2022年第03期

• 同源盒基因C10对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及在肿瘤微环境中的作用机制

  姜文艺,雷清扬,刘莎莎,杨黎,杨波,张毅

  目的 探讨同源盒基因C10(HOXC10)对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其在肿瘤微环境中的作用机制。方法 应用癌症基因组图谱(TCGA)与中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库分析HOXC10在高级别胶质瘤(胶质母细胞瘤)和低级别胶质瘤中的表达水平及其对患者生存的影响。按照HOXC10-siRNA转染操作说明书分别将HOXC10-siRNA 1(HOXC10-siRNA 1组)、HOXC10-siRNA 2(HOXC10-siRNA 2组)和siRNA NC(NC组)转染至U251细胞，在转染组中分别加入100 ng/ml重组蛋白趋化因子配体2(reCCL2)，记为HOXC10-siRNA 1+reCCL2和HOXC10-siRNA 2+reCCL2组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测各组细胞中HOXC10 mRNA和目的蛋白的表达，细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖能力，Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，多因子检测各组细胞中趋化因子的表达。共孵育实验检测HOXC10和趋化因子配体2(CCL2)招募并极化肿瘤相关巨噬细胞(M2型巨噬细胞)的作用。结果 TCGA数据库高级别脑胶质瘤中HOXC10中位表达水平(8.51)高于低级别脑胶质瘤(1.00， <0.001)，CGGA数据库高级别脑胶质瘤中HOXC10中位表达水平(0.83)高于低级别脑胶质瘤(0.00, <0.001)。TCGA数据库HOXC10高表达患者5年生存率(28.2%)低于HOXC10低表达者(78.7%， <0.001)，CGGA数据库HOXC10高表达患者5年生存率(20.3%)低于HOXC10低表达者(58.0%, <0.001)。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞迁移数[分别为(45±3)个和(69±4)个]均低于NC组[(159±3)个，均 <0.05]。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组48 h细胞迁移率[分别为(15±2)%和(28±4)%]低于NC组[(80±5)%，均 <0.05]。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞中Vimentin的表达水平分别为141 740.00±34 024.56和94 655.00±5 687.97，N-cadherin的表达水平分别为76 810.00±14.14和94 254.00±701.45，β-catenin的表达水平分别为75 786.50±789.84和107 296.50±9 614.53，均低于与NC组(分别为233 768.50±34 114.37、237 154.50±24 715.50和192 449.50±24 178.10，均 <0.05)。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞(96 h)吸光度值(分别为0.44±0.05和0.32±0.02)低于NC组(0.92±0.12，均 <0.05)，HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞凋亡率[分别为(10.23±1.24)%和(13.81±2.16)%]高于NC组[(4.60±0.07)%，均 <0.05]。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组U251细胞中CCL2的表达水平分别为271.63±44.27和371.66±50.21，低于NC组(933.93±29.84，均 <0.05)，CCL5(分别为234.81±5.95和232.62±5.72)、CXCL10(分别为544.13±48.14和500.87±15.65)、CXCL11的表达水平(分别为215.75±15.30和176.18 ±16.49)均高于NC组(分别为9.98±0.71、470.54±18.84和13.55±0.73，均 <0.05)。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组招募CD14 THP1细胞数分别为(159.33±1.15)个和(170.67±1.15)个，低于NC组[(360.00±7.81)个，均 <0.05]；HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组招募CD14 THP1细胞数分别为(159.33±1.15)个和(170.67±1.15)个，低于HOXC10-siRNA 1+reCCL2组和HOXC10-siRNA 2+reCCL2组[分别为(287.00±3.61)个和(280.67±2.31)个，均 <0.05]。HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞中肿瘤生长因子β表达水平(分别为0.30±0.02和0.28±0.02)低于NC组(1.06±0.10，均 <0.05)，HOXC10-siRNA 1组和HOXC10-siRNA 2组细胞中NOS2表达水平(分别为11 413.95±1 911.85和5 894±945.21)高于NC组(13.39±4.32，均 <0.05)。 结论 HOXC10在脑胶质瘤中高表达，且与脑胶质瘤患者不良预后有关。敲低HOXC10的表达可降低人脑胶质瘤U251细胞的增殖、迁移及转移能力。HOXC10在脑胶质瘤微环境中可能通过促进CCL2的表达进而招募并极化肿瘤相关巨噬细胞即M2型巨噬细胞从而发挥免疫抑制的作用。

• circZNF609靶向miR-153调控弥漫大B细胞淋巴瘤增殖和凋亡

  杨成胜,娄莹,可秋萍,徐学聚,张园

  目的 探讨circZNF609靶向miR-153调控弥漫大B细胞淋巴瘤增殖和凋亡的分子机制。方法 选取2018年7月至2019年12月于郑州大学第一附属医院诊治的弥漫大B细胞淋巴瘤患者的淋巴瘤组织50例，选取同期经病理诊断证实为反应性增生的正常淋巴结组织30例作为对照。实时荧光定量PCR法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤组织和对照组织中circZNF609的表达。弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY19细胞分为Control组(空白对照)、si-con组(转染siRNA control)、si-ZNF609组(转染circZNF609 siRNA)、si-ZNF609+Anti-NC组(共转染circZNF609 siRNA和inhibitor control)和si-ZNF609+Anti-miR-153组(共转染circZNF609 siRNA和miR-153 inhibitor)。细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞周期、凋亡情况，Western blot检测C-caspase-3、cyclin D1、p21蛋白的表达水平，荧光素酶报告系统鉴定circZNF609与miR-153的关系。结果 弥漫大B细胞淋巴瘤组织中circZNF609的表达水平(1.44±0.22)高于对照组(0.37±0.12， <0.001)。si-ZNF609组细胞存活率[(51.74±6.39)%]低于Control组和si-con组[分别为(100.00±10.23)%和(99.64±11.67)%，均 <0.001]，G /G 期细胞比例[(63.25±4.11)%]高于Control组和si-con组[分别为(48.62±4.32)%和(47.12±3.20)%，均 <0.001]，细胞凋亡率[(13.36±1.42)%]高于Control组和si-con组[分别为(3.65±0.47)%和(3.84±0.62)%，均 <0.001]，C-caspase-3、p21蛋白表达水平(分别为0.85±0.09和0.90±0.08)高于Control组(分别为0.38±0.04和0.65±0.07)和si-con组(分别为0.39±0.05和0.66±0.05，均 <0.001)，cyclin D1蛋白表达水平(0.40±0.03)低于Control组和si-con组(分别为0.52±0.06和0.53±0.04，均 <0.001)。circZNF609和miR-153互为靶向关系。si-ZNF609+Anti-miR-153组细胞存活率[(169.92±13.25)%]高于si-ZNF609+Anti-NC组[(100.00±9.68)%， <0.001]，细胞G /G 期比例[(52.01±3.62)%]和凋亡率[(8.20±0.87)%]低于si-ZNF609+Anti-NC组[分别为(64.51±5.17)%和(14.03±1.17)%，均 <0.001]，C-caspase-3、p21蛋白表达水平(分别为0.42±0.06和0.52±0.06)低于si-ZNF609+Anti-NC组(分别为0.80±0.07和0.92±0.10，均 <0.001)，cyclin D1蛋白表达水平(0.68±0.07)高于si-ZNF609+Anti-NC组(0.39±0.04， <0.05)。 结论 下调circZNF609的表达靶向miR-153抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY19细胞增殖并诱导细胞凋亡。

• miR-4484调控整合素α 6在胃癌组织中的表达及其意义

  钟慧钰,钟源,温阳,陶昕彤,宋兴勃,陆小军

  目的 探讨整合素α6(ITGA6)蛋白、基因和miR-4484与胃癌病理分期的关系。方法 收集2017年6—9月于四川大学华西医院行手术治疗(未经辅助治疗)的30例原发性胃癌患者的胃癌及癌旁(距离瘤体>5 cm)正常胃黏膜组织。采用实时荧光定量PCR检测miR-4484和ITGΑ6的表达水平，采用Western blot法检测ITGA6蛋白的表达水平，采用双荧光素酶报告基因验证ITGΑ6与miR-4484的关系，采用Spearman相关分析明确miR-4484与ITGA6在胃癌组织中表达水平的相关性。结果 胃癌组织中ITGA6的表达水平(32.30±13.47)高于正常癌旁组织(24.55±10.25， ＝0.015)，受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.660，其诊断敏感度为43.3%，特异度为96.7%。胃癌组织中miR-4484的表达水平(4.11±2.87)低于正常癌旁组织(5.75±2.80， ＝0.029)，ROC曲线下面积为0.690，其敏感度为30.0%，特异度为86.7%。胃癌组织中miR-4484表达水平与ITGA6呈负相关( ＝-0.621， <0.001)。ITGA6在胃癌组织中的表达水平(0.65±0.19)高于正常癌旁组织(0.26±0.12， <0.001)。与ITGΑ6 3′UTR野生型+miR-NC组比较，ITGΑ6 3′UTR野生型+miRNA mimics组细胞荧光素酶活性降低(分别为50.69±5.10和34.00±1.19， <0.001)，ITGΑ6 3′UTR野生型+ASO miR-4484组细胞荧光素酶活性高于ITGΑ6 3′UTR野生型+miR-NC组(分别为82.44±6.37和50.69±5.10， <0.001)，ITGA6为miR-4484的直接靶基因。T1、T2、T3、T4(4a和4b)期胃癌组织中miR-4484的表达水平分别为9.98±2.24、5.28±2.03、2.92±2.04和4.11±2.87，差异有统计学意义( <0.001)。N0、N1、N2、N3期胃癌组织中ITGA6的表达水平分别为29.55±8.32、21.71±3.75、24.60±8.79和40.69±15.83，差异有统计学意义( ＝0.022)。N0、N1、N2、N3期胃癌组织中miR-4484的表达水平分别为5.01±3.52、5.48±2.76、5.88±1.83和2.30±1.56，差异有统计学意义( ＝0.032)。M0、M1期胃癌组织中ITGA6的表达水平分别为26.28±7.66和52.08±8.12，差异有统计学意义( <0.001)。M0、M1期胃癌组织中miR-4484的表达水平分别为4.95±2.74和1.34±0.80，差异有统计学意义( <0.001)。 结论 ITGΑ6在胃癌组织中呈高表达，miR-4484在胃癌组织中呈低表达，且其表达水平与胃癌的临床病理特征有关。ITGΑ6为miR-4484的直接靶基因，miR-4484可能通过调控ITGΑ6发挥抑制胃癌侵袭转移的作用，miR-4484和ITGΑ6可能作为新的胃癌预后标志物及潜在的治疗靶点。

• 肝细胞癌尿代谢组学初步研究

  解修峰,孙艳,赵晓航

  目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者尿液小分子代谢物及其代谢特征。方法 采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术分析健康人群( ＝10)、肝血管瘤患者( ＝10)和HCC患者( ＝10)尿液中的小分子代谢物。采用正交偏最小二乘法-判别分析和层次聚类分析以及单因素分析等方法分析全组人群的尿液代谢物产物差异。 结果 全组人群中，差异代谢物381种，其中上调的代谢物96种，下调的代谢物285种。与HCC有关的特异性尿液代谢物55种，包括21种上调的代谢物，如Acetyl-DL-Leucine、Ala Asp、HoPhe-Gly-OH等，以及34种下调的代谢物，如Selenocystathionine、Met Trp Met Cys、Valsartan acid等。京都基因与基因组百科全书通路分析显示，差异代谢物主要富集于谷氨酰胺/谷氨酸代谢、赖氨酸生物合成、三羧酸循环和嘌呤代谢等通路。结论 HCC发生过程中伴随多种代谢物和代谢途径改变，分析HCC患者尿液的特征代谢谱，有助于发现肝癌的代谢标志物和潜在的治疗靶点。

• 三阴性乳腺癌中程序性死亡配体抗体克隆22C3和SP142的表达分析及预后研究

  张静,袁培,雷荟仔,刘秀云,李鑫,应建明,孙广毅,王淑莲,吕宁

  目的 探讨程序性死亡配体1(PD-L1)不同抗体克隆SP142和22C3在三阴性乳腺癌中的表达情况，分析不同抗体表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集2010年8月至2013年12月于中国医学科学院肿瘤医院治疗的259例三阴性乳腺癌(TNBC)患者的临床病理资料，将患者手术组织样本切片进行SP142和22C3免疫组化染色，分别评估肿瘤细胞及肿瘤浸润免疫细胞PD-L1的表达情况，分析2种抗体表达与患者临床病理特征的关系，采用Cox比例风险回归模型分析PD-L1表达与无病生存时间(DFS)和总生存时间(OS)之间的相关性。结果 SP142(免疫细胞表达评分≥1%)与22C3(联合阳性评分≥1分)在TNBC中的阳性表达率分别为42.1%(109/259)和41.3%(107/259)，二者总符合率为82.3%，阳性表达病例的 值为0.571，差异有统计学意义( 0.05)。 结论 PD-L1(22C3)和PD-L1(SP142)在TNBC中表达情况存在差异，临床检测中二者不可相互替代；PD-L1阳性表达患者预后更好，PD-L1(SP142)阳性患者DFS明显延长。

• 结直肠癌中皮动蛋白的表达与病理特征及预后的关系

  赵传多,周思成,苏昊,梁建伟,周志祥

  目的 探讨皮动蛋白(cortactin)在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2006—2009年于中国医学科学院肿瘤医院确诊为结直肠癌并接受治疗的患者319例，利用免疫组化技术检测组织芯片中正常结直肠黏膜组织和结直肠癌组织中cortactin的表达，生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验，多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果 cortactin在结直肠癌组织和正常结直肠黏膜组织中的阳性表达率分别为61.1%(195/319)和5.6%(18/319， <0.001)。T分期、N分期、美国癌症联合委员会(AJCC)分期、肿瘤分化程度、神经侵犯和术前癌胚抗原(CEA)水平与cortactin表达状态有关(均 <0.05)。在Ⅱ~Ⅲ期患者中，cortactin阳性表达与较差的无病生存( ＝0.036)和总生存( ＝ 0.043)有关。对于Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者，术后辅助治疗与无病生存( ＝0.007)和总生存( ＝0.015)有关。脉管瘤栓、病理类型、术前CEA水平和cortactin表达状态为无病生存的独立影响因素(均 <0.05)，年龄、AJCC分期、术前CEA水平和cortactin表达状态是总生存的独立影响因素(均 <0.05)，术前CEA水平和cortactin表达状态为无病生存和总生存的独立影响因素(均 <0.05)。 结论 cortactin在结直肠癌组织中表达，在Ⅱ~Ⅲ期结直肠癌患者中，cortactin是一个潜在的预后因子。

• 中国胃癌临床试验10年进展

  黄慧瑶,吴大维,祝琦,俞悦,王海学,王骏,尕曼,孟鑫雨,杜静婷,苗双曼,赵志霞,王欣,商朴,郭珉江,刘丽宏,唐玉,李宁,曹彩,徐兵河,孙燕,赫捷

  目的 系统汇总2012—2021年中国胃癌肿瘤药物临床试验的研究进展及上市药物概况，为相关部门提供数据及决策证据。方法 基于中国国家食品药品监督管理总局药物临床试验登记与信息公示平台登记数据库及国产药品及进口药品数据查询系统，分析2012年1月1日至2021年12月31日胃癌药物临床试验、涉及试验药品及上市药物信息，比较中国企业和国外企业在试验范围、试验分期、治疗线数及药物类型、作用和机制研究等方面的差异。结果 2012—2021年间相关药物临床试验在中国注册数量为114项，占同期全部抗肿瘤药物临床试验的3.7%(114/3 041)，临床试验研究数量2016年后有所增加，2020年达到峰值(32项)。85项(74.6%，85/114)临床试验由中国制药企业发起，中国企业国际多中心试验比例低于国外企业(分别为11.9%和67.9%， <0.001)，中国企业试验Ⅰ期患者比例更高(分别为35.3%和6.9%， ＝0.001)。相关试验共涉及76种药物，其中65种(85.5%)为靶向药物。靶点方面，以人表皮生长因子受体2(14个)最常见，其次是程序性死亡受体1、血管内皮生长因子受体(VEGFR)多靶点和VEGFR。2012—2021年，共有4种胃癌药物上市，3种为国产药物。 结论 2012—2021年，中国在胃癌药物研发方面有所进展，但与严重的疾病负担比较投入仍显不足。有针对性地加强胃癌药物在新靶点发现、成熟靶点挖掘、联合用药开发及早线治疗推进等多个方面的研发投入是未来的重点工作，尤其是国内企业未来的重点工作。

• 立体定向放射技术治疗结直肠癌肝与肺寡转移的Ⅱ期临床研究

  雷俊琴,刘文扬,唐源,唐玉,李宁,任骅,依荷芭丽·迟,孙永琨,张雯,毕新宇,赵建军,房辉,卢宁宁,周爱萍,王淑莲,宋永文,刘跃平,陈波,亓姝婻,蔡建强,李晔雄,金晶

  目的 探讨立体定向放射治疗(SBRT)用于结直肠癌(CRC)寡转移的安全性和有效性。方法 研究为前瞻性、单臂Ⅱ期临床研究。选取原发灶经组织病理学证实为CRC、肝或肺转移灶数目为1~5个、单个转移灶最大长径≤5 cm的患者。所有转移病灶均接受SBRT，主要研究终点为3年局部控制率(LC)，次要研究终点为≥3级急性治疗相关不良反应，1、3年生存率和无进展生存率。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验。结果 选取2016—2019年中国医学科学院肿瘤医院CRC患者48例，共60个转移灶(37个肝转移灶和23个肺转移灶)接受了基于呼吸运动管理下的SBRT治疗。46例患者治疗了1~2个转移灶，转移灶的中位长径为1.3 cm，中位等效生物学剂量为100.0 Gy。全组患者的中位随访时间为19.5个月，共25个转移病灶局部复发，中位无局部复发生存时间为15个月，1年LC、1年生存率和1年无进展生存率分别为70.2%(95% 为63.7%~76.7%)、89.0%(95% 为84.3%~93.7%)和40.4%(95% 为33.0%~47.8%)。计划靶区体积和总剂量均为影响LC的预后因素(均 <0.05)。肝转移和肺转移患者的1年LC分别为58.7%和89.4%( ＝0.015)，1年生存率分别为89.3%和86.5%( ＝0.732)，1年无进展生存率分别为30.5%和65.6%( ＝0.024)。全组患者未发生≥3级的急性不良反应。 结论 在严格的呼吸运动管理及放疗质控下，SBRT治疗结直肠癌寡转移安全有效。

• 子宫内膜非典型增生及早期子宫内膜癌初次保留生育功能治疗的临床疗效

  何翊姣,王益勤,戴一博,周蓉,鹿群,刘国莉,王建六

  目的 分析子宫内膜非典型增生和早期子宫内膜癌患者保留生育功能治疗的临床治疗效果。方法 收集2005年12月至2019年9月于北京大学人民医院行保留生育功能治疗的110例子宫内膜非典型增生及子宫内膜癌患者的临床资料，回顾性分析患者的一般情况、病理类型、治疗方案及其肿瘤结局和妊娠结局。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验。结果 110例子宫内膜非典型增生(62例)和子宫内膜癌(48例)患者保留生育功能治疗后，有效率为94.5%(104/110)，完全缓解率为84.5%(93/110)，部分缓解率为10.0%(11/110)，复发率为29.0%(27/93)。子宫内膜非典型增生和子宫内膜癌患者完全缓解率分别为90.3%(56/62)和77.1%(37/48)，差异无统计学意义( ＝0.057)；子宫内膜癌复发率(40.5%)高于子宫内膜非典型增生(21.4%， ＝0.022)。完全缓解患者有妊娠意愿者41例，妊娠率为70.7%(29/41)，活产率为56.1%(23/41)。子宫内膜非典型增生患者的活产率为68.2%(15/22)，子宫内膜癌患者为42.1%(8/19)，差异有统计学意义( ＝0.032)。病理类型( ＝0.044)与肿瘤复发有关。 结论 子宫内膜非典型增生和子宫内膜癌保留生育功能治疗有较高的完全缓解率和妊娠率，子宫内膜癌复发率高于子宫内膜非典型增生，子宫内膜非典型增生患者的活产率高于子宫内膜癌患者。