中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2022年第07期

• 胃癌来源间充质干细胞通过JAK2/STAT3信号通路调控胃癌微环境中巨噬细胞向M2亚型极化

  李伟,赵绍林,郑萍,史沛芹,周颖,张婷,霍娟,杨晋

  目的 探讨胃癌微环境中肿瘤来源间充质干细胞对巨噬细胞M2亚型极化的调节作用及机制。方法 胃癌及癌旁正常组织来源于2018年于连云港市第一人民医院行胃癌切除的患者(4例)。将THP-1诱导分化来源的巨噬细胞与胃癌来源间充质干细胞(GC-MSCs)进行体外共培养，细胞分为对照组(Mac组)、细胞上清处理组(Mac+GC-MSC-CM组)、Mac+GC-MSC-TW组、Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM组、Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组和Mac+IL-6/IL-8-blocked-GC-MSC-CM组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术和Luminex液态芯片技术，分别评价巨噬细胞中M2亚型相关基因、细胞表面标记蛋白以及细胞因子谱的表达情况。利用Luminex液态芯片技术检测并筛选GC-MSCs中可能发挥诱导巨噬细胞向M2亚型极化作用的关键细胞因子，并采用中和抗体试验进行验证。Western blot法检测GC-MSCs不同处理条件下，巨噬细胞中M2亚型极化相关信号通路蛋白表达情况。结果 Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中M2亚型相关基因Ym-1和Fizz-1表达水平分别为1.53±0.32和13.22±1.05，均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38，均 <0.05)，iNOS基因表达水平(0.60±0.41)低于Mac组(1.06±0.38, ＝0.023)。Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中Ym-1和Fizz-1基因表达水平分别为1.47±0.09和13.16±2.77，均高于Mac组(分别为1.00±0.05和1.21±0.38，均 <0.05)，iNOS基因表达水平(0.56±0.03)低于Mac组(1.06±0.38， ＝0.026)。Mac+GC-MSC-CM组和Mac+GC-MSC-TW组巨噬细胞中CD163 和CD204 细胞比例分别为3.80%和4.40%，均高于Mac组(0.60%)。Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞中白细胞介素10(IL-10)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子的表达水平分别为(592.60±87.52)pg/ml、(1 346.80±64.70)pg/ml、(11 256.00±29.03)pg/ml和(1 463.90±66.67)pg/ml，均高于Mac组[分别为(41.03±2.59)pg/ml、(17.35±1.79)pg/ml、(5 213.30±523.71)pg/ml和(267.12±12.06)pg/ml，均 <0.05]，肿瘤坏死因子α、IP-10、RANTES和巨噬细胞炎症蛋白1α的表达水平分别为(95.57±9.34)pg/ml、(410.48±40.68)pg/ml、(6 967.30±1.29)pg/ml和(1 538.70±283.04)pg/ml，均低于Mac组[分别为(138.01±24.31)pg/ml、(1 298.60±310.50)pg/ml、(14 631.00±4.21)pg/ml和(6 633.20±1.47)pg/ml，均 <0.05]。IL-6、IL-8在GC-MSCs中的表达水平分别为(11 185.02±2.82)pg/ml和(12 718.03±370.17)pg/ml，均高于胃癌癌旁间充质干细胞[分别为(270.71±59.38)pg/ml和(106.04±32.84)pg/ml，均 <0.05]。Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM和Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中CD86 细胞的比例(分别为28.80%和31.40%)均高于Mac+GC-MSC-CM组(24.70%)。Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM和Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组中CD204 细胞比例(分别为9.90%和8.70%)均低于Mac+GC-MSC-CM组(13.70%)。Mac+GC-MSC-CM组巨噬细胞M2亚型极化相关信号通路蛋白p-JAK2和p-STAT3表达水平分别为0.86±0.01和1.08±0.01，均高于Mac组(分别为0.50±0.01和0.82±0.01，均 <0.05)，Mac+IL-6-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中p-JAK2蛋白表达水平(0.47±0.02)低于Mac+GC-MSC-CM组(0.86±0.01， <0.05)。Mac+IL-8-blocked-GC-MSC-CM组巨噬细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平分别为0.50±0.01和0.85±0.01，均低于Mac+GC-MSC-CM组(分别为0.86±0.01和1.08±0.01，均 <0.05)。Mac+IL-6/IL-8-blocked-GC-MSC-CM组细胞中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平分别为0.37±0.01和0.65±0.01，均低于Mac+GC-MSC-CM组(均 <0.05)。 结论 GC-MSCs通过分泌高水平IL-6和IL-8因子促进巨噬细胞中JAK2/STAT3信号通路活化，从而有效诱导胃癌微环境中巨噬细胞向具有促肿瘤作用的M2亚型发生极化。

• 卵巢癌细胞来源的外泌体对成纤维细胞分化的影响

  张丹,宋克娟,任远中,隋磊,姚勤

  目的 探讨卵巢癌细胞分泌的外泌体对卵巢间质正常成纤维细胞(NFs)分化和迁移能力的影响。方法 NFs来自2019年5—12月于青岛大学附属医院行子宫肌瘤切除的患者。使用超高速离心方法从卵巢癌SKOV3细胞培养上清中提取外泌体，将条件培养基(CM)、SKOV3-exo、磷酸盐缓冲液分别与NFs细胞共培养，分别记为CM组、SKOV3-exo组和空白组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测NFs中成纤维细胞活化蛋白(FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平，采用Transwell实验检测NFs细胞的迁移能力。结果 透射电镜下可观察到SKOV3的培养上清液中所提取到的细胞外囊泡为长径为30~100 nm，呈杯托样双层膜结构。外泌体中TSG101和HSP27蛋白表达水平分别为1.00±0.05和1.12±0.13，均高于卵巢癌SKOV3细胞(分别为0.22±0.21和0.36±0.14，均 <0.05)。PKH67荧光标记的外泌体可被NFs摄取。CM组细胞中α-SMA、FAP mRNA表达水平分别为2.91±0.15和3.21±0.33，SKOV3-exo组分别为3.50±0.21和4.63±0.24，均高于空白组(分别为1.00±0.06和1.00±0.13，均 <0.05)。CM组和SKOV3-exo组细胞中α-SMA(分别为0.89±0.11和1.25±0.09)、FAP蛋白表达水平(分别为0.81±0.09和1.20±0.12)均高于空白组(分别为0.12±0.31和0.11±0.19，均 <0.05)。CM组和SKOV3-exo组细胞迁移数分别为(215.01±14.80)个和(389.72±19.43)个，均高于空白组[(113.73±4.70)个，均 <0.05]。 结论 SKOV3分泌的外泌体可被NFs摄取，使其激活分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)并提高其迁移能力，说明卵巢癌细胞可能通外泌体的途径促进卵巢间质NFs向CAFs的转化，进而促进卵巢癌的发展。

• 宫颈癌及癌前病变治疗性疫苗临床研究进展与启示

  蔡珊,缪珂,谭小玉,程思,李丹彤,曾雪扬,杨羽,孟若谷,刘志科,李燕,李克莉,孙凤,詹思延

  目的 系统总结并分析宫颈癌及癌前病变治疗性疫苗的临床研究进展。方法 系统检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library、Proquest、ClinicalTrails.gov、SinoMed、中国知网、维普网、万方数据知识服务平台，检索日期为建库至2021年2月18日。对纳入的合格研究进行质量评价，并从文献基本信息、研究设计、疫苗信息、研究对象、结局指标等多方面归纳梳理，定性总结临床研究进展。结果 共纳入71篇文献，其中随机对照试验14篇，类实验研究15篇，队列研究4篇，病例对照研究1篇，病例系列研究34篇，病例报告3篇。研究对象包括1989—2021年18个国家15~79岁患子宫颈癌或癌前病变的女性。癌前病变治疗性疫苗类文献40篇( ＝22 867))，涉及疫苗6类21种。研究结果显示，与对照组比较，3种已上市的疫苗[希瑞适(Cervarix)、四价疫苗(Gardasil)、九价疫苗(Gardasil 9)]作为辅助免疫治疗在预防癌前病变复发方面具有显著疗效。特异性治疗性疫苗改良牛痘安卡拉E2重组疫苗相关研究已到临床Ⅲ期，改良牛痘安卡拉E2重组疫苗能完全消除大部分高级别癌前病变。癌前病变治疗性疫苗均显示出良好的安全性。子宫颈癌治疗性疫苗类文献31篇( ＝781)，涉及疫苗7类19种，均未上市。25篇文献研究为无对照研究，结果显示，疫苗在实体瘤疗效评估、预防宫颈癌复发、延长中位生存时间等方面有效，但由于研究缺少对照组，疫苗疗效无法进行统计学检验。9篇研究显示患者经治疗出现严重不良事件，7篇文献报道患者出现的严重不良事件不能排除是宫颈癌治疗性疫苗导致的结果。 结论 与宫颈癌治疗性疫苗比较，癌前病变治疗性疫苗的文献证据相对较成熟。已上市的4种疫苗均为宫颈癌癌前病变治疗性疫苗，但一般作为手术辅助免疫治疗或阴道感染治疗，不作特异性治疗使用。其他宫颈癌及癌前病变特异性治疗性疫苗均处于研究初期，以小样本量Ⅰ或Ⅱ期临床试验为主，有效性和安全性数据有限，仍有待进一步研究。

• 中央区乳腺癌乳头乳晕复合体的外科处理与探讨

  张开通,关山,张冰,王宇,岳朝森,程苒

  目的 探讨中央区乳腺癌乳头乳晕复合体(NAC)的外科处理策略。方法 回顾性分析2017年12月至2020年12月于首都医科大学附属北京同仁医院接受手术的164例中央区乳腺癌的临床病理资料。术前采用影像学检查测量肿瘤边缘至乳头最近距离(TND)、肿瘤长径，记录是否存在乳头内陷、乳头溢液、乳头破溃(包括乳头Paget′s病)等情况。TND≥0.5 cm、无NAC受侵征象(乳头内陷、乳头破溃)且术中冰冻病理示NAC切缘阴性者保留NAC；对于存在NAC受累征象或TND<0.5 cm以及术中冰冻病理证实NAC基底切缘阳性者均切除NAC。影响因素分析采用 检验或Fisher精确检验。 结果 164例中央区乳腺癌患者中，保乳手术(保乳组)73例，保留乳头乳晕复合体乳房切除术(NSM组)43例，乳房全切术(乳房全切组)34例，保留皮肤乳房切除术(SSM组)14例。58例患者行NAC切除(乳房全切组34例，SSM组14例，保乳组10例)，病理证实NAC受侵25例(乳房全切组12例，SSM组9例，保乳组4例)。TND( ＝0.040)、乳头内陷( ＝0.031)与NAC受累有关，TND<0.5 cm时NAC受累及的可能性更高( ＝0.014)；肿瘤大小( ＝0.519)、淋巴结转移( ＝0.847)、血性乳头溢液( ＝0.742)与NAC受侵无关。全组患者随访12~48个月，局部复发1例，远处转移3例。 结论 对于中央区乳腺癌患者，TND≥0.5 cm、无NAC受侵征象(乳头内陷、乳头破溃)且术中冰冻病理NAC切缘阴性者可以采用保留NAC的手术，而对于TND<0.5 cm或伴有NAC受侵征象时应切除NAC，同时可以选择乳头重建以改善中央区乳腺癌患者的术后外形。

• 浸润性肺腺癌分化程度预测模型的临床价值

  单文莉,孔丹,张辉,张建东,段绍峰,郭莉莉

  目的 探讨基于CT图像影像组学列线图模型预测肺浸润性腺癌(IAC)分化程度的价值及免疫组化因子在肿瘤不同分化程度间的表达差异。方法 收集2017年12月至2018年9月南京医科大学附属淮安第一医院经手术病理证实为肺IAC患者的临床病理资料。对所有勾画感兴趣区进行高通量特征采集，经最小绝对收缩算子降维处理后构建预测模型。采用受试者工作特征曲线评估临床特征模型、影像组学模型及两者联合的个体化预测模型鉴别肺IAC分化程度的预测效能，免疫组化Ki-67、NapsinA、甲状腺转录因子1(TTF-1)在IAC不同分化程度的组间比较采用秩和检验。结果 全组IAC病灶中共提取出396个高通量特征，筛选出10个泛化能力较高、与IAC分化程度相关的特征。训练组低分化IAC的影像组学评分平均值(1.206)高于中高分化患者(0.969， ＝0.001)，测试组低分化IAC的影像组学评分平均值(1.545)高于中高分化患者(-0.815， <0.001)。中高分化IAC组和低分化IAC组患者的性别( <0.001)、胸膜牵拉征( ＝0.005)、毛刺征( ＝0.033)差异均有统计学意义。多因素logistic回归分析显示，性别、胸膜牵拉征与IAC分化程度有关(均 <0.05)。临床特征模型由年龄、性别、胸膜牵拉征、毛刺征、肿瘤血管征、空泡征组成，个体化预测模型由性别、胸膜牵拉征及影像组学评分构成，并由列线图表示。影像组学模型、临床特征模型和个体化预测模型的Akaike信息标准值分别为54.756、82.214和53.282。个体化预测模型对鉴别肺IAC分化程度的效能最高，个体化预测模型在训练组和测试组中的曲线下面积(AUC)分别为0.92(95% ：0.86~0.99)和0.88(95% ：0.74~1.00)；影像组模型在训练组和测试组中预测肺IAC分化程度的AUC分别为0.91(95% ：0.83~0.98)和0.87(95% ：0.72~1.00)；临床特征模型在训练组和测试组中预测肺IAC分化程度的AUC分别为0.75(95% ：0.63~0.86)和0.76(95% ：0.59~0.94)。Ki-67在低分化IAC中的表达水平高于中高分化IAC( <0.001)，NapsinA、TTF-1在中高分化IAC中的表达高于低分化IAC(均 <0.05)。 结论 由性别、胸膜牵拉征及影像组学评分构建的个体化预测模型对浸润性肺腺癌的分化程度具有较高的鉴别效能。Ki-67、NapsinA、TTF-1在浸润性肺腺癌不同分化程度间的表达不同。