中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2023年第02期

• 程序性死亡蛋白配体1在CD133 人肝癌干样细胞中的表达及功能研究

  柏玉娣,施茂林,李思琪,汪小莉,彭晶晶,周代君,孙非凡,李华,王超,杜敏,张涛,李东

  目的 探讨肝癌干样细胞(LCSLC)中程序性死亡蛋白配体1(PD－L1)的表达及其对LCSLC肿瘤干细胞特性和肿瘤生物学功能的影响，探索LCSLC中调控PD－L1表达变化的上游信号通路和PD－L1调控干细胞特性和肿瘤生物学功能的下游分子机制。方法 采用无血清球培养法培养肝癌细胞HepG2，获得LCSLC。采用流式细胞术检测LCSLC中CD133等干性标志物分子的表达，Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)检测其干性特征分子和PD－L1的表达，细胞功能实验检测其肿瘤生物学功能，确认所获得的LCSLC具备肿瘤干细胞特性。以细胞信号通路抑制剂处理LCSLC，明确介导PD－L1表达变化的相关上游信号通路。利用小干扰RNA(siRNA)下调LCSLC中PD－L1的表达，检测干性特征分子的表达变化、LCSLC体内外肿瘤生物学功能变化以及下游细胞信号通路的变化。结果 与普通HepG2细胞比较，LCSLC中CD133的表达率升高[分别为(92.78±6.91)%和(1.40±1.77)%， 0.05)。siRNA敲低PD－L1的表达后，与siRNA－NC组比较，siRNA－PD－L1组LCSLC中CD133、Nanog、Oct4A和Snai1的表达均降低(均 0.05)。 结论 CD133 LCSLC中PD－L1高表达，对于维持其干性特征、促进其肿瘤生物学功能具有重要意义。

• 肿瘤坏死因子受体相关因子6第331位泛素化位点突变对结直肠癌细胞生物学特征的影响及其机制

  何若凡,王琴,林春霖,林鹏航,陈辉,黄永建,杨树钢,叶建新,朱广伟

  目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)第331位泛素化位点突变对结直肠癌细胞生物学特征的影响及其相关机制。方法 将带有绿色荧光蛋白标签的TRAF6基因表达质粒的慢病毒(pCDH－3×FLAG－TRAF6)和突变质粒慢病毒(pCDH－3×FLAG －TRAF6－331mut)分别感染结直肠癌细胞SW480和HCT116，荧光显微镜观察细胞感染情况，Western blot检测TRAF6和TRAF6－331mut在细胞中的表达。采用细胞计数试剂盒8法和平板克隆实验检测TRAF6组和TRAF6－331mut组结直肠癌细胞的增殖能力，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力，免疫共沉淀方法检测TRAF6和TRAF6－331mut与泛素的赖氨酸结合位点K48和K63的泛素化作用，Western blot检测过表达TRAF6和TRAF6－331mut对核因子κB(NF－κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/激活蛋白1(AP－1)信号通路的影响。结果 荧光显微镜下观察到病毒成功感染结直肠癌细胞。Western blot检测显示，TRAF6和TRAF6－331mut在结直肠癌细胞中成功表达。CCK－8法检测结果显示，到第4天，TRAF6－331mut组HCT116和SW480细胞的值分别为1.89±0.39和1.88±0.24，均低于TRAF6组(分别为2.09±0.12和2.17±0.45，值分别为0.036和0.011)。平板克隆形成实验结果显示，TRAF6－331mut组HCT116和SW480细胞的克隆数分别为(120±14)个和(85±14)个，均低于TRAF6组[分别为(190±21)个和(125±13)个，值分别为0.001和0.002]。细胞划痕实验结果显示，48 h后，TRAF6－331mut组HCT116和SW480细胞的伤口愈合距离百分比分别为(31±12)%和(33±14)%，均低于TRAF6组[分别为(43±13)%和(43±7)%，值分别为0.005和0.009]。Transwell迁移实验结果显示，TRAF6－331mut组HCT116和SW480细胞的迁移数分别为(104±13)个和(107±12)个，均低于TRAF6组[分别为(172±19)个和(138±16)个，值分别为<0.001和0.002]。Transwell侵袭实验结果显示，TRAF6－331mut组HCT116和SW480细胞的穿膜数分别为(103±17)个和(92±13)个，均低于TRAF6组[分别为(177±20)个和(127±18)个，值分别为0.008和0.009]。免疫共沉淀法检测结果显示，在与K48共转染的293T细胞中，被TRAF6－331mut下拉的K48链泛素蛋白的表达量为0.57±0.19，低于野生型TRAF6下拉的K48链泛素蛋白的表达量(0.84±0.04，＝0.014)；在与K63共转染的293T细胞中，被TRAF6－331mut下拉的K63链泛素蛋白的表达量为0.31±0.13，低于野生型TRAF6下拉的K63链泛素蛋白的表达量(0.89±0.08，<0.001)。Western blot检测显示，TRAF6－331mut－HCT116细胞中NF－κB、p－NF－κB和p－AP－1蛋白表达水平分别为0.63±0.08、0.42±0.08和0.60±0.07，低于TRAF6－HCT116细胞(均为1.00±0.00，值分别为0.002、<0.001和<0.001)，AP－1蛋白表达水平为0.89±0.06，与TRAF6－HCT116细胞(1.00±0.00)比较，差异无统计学意义(＝0.051)；TRAF6－331mut－SW480细胞中NF－κB、p－NF－κB和p－AP－1蛋白表达水平分别为0.50±0.06、0.51±0.04和0.48±0.02，低于TRAF6－SW480细胞(均为1.00±0.00，均<0.001)，AP－1蛋白表达水平为0.90±0.06，与TRAF6－ SW480细胞(1.00±0.00)比较，差异无统计学意义(＝0.087)。结论 TRAF6基因第331泛素化位点突变可能阻止了TRAF6与泛素赖氨酸位点K48和K63的结合，进而影响下游NF－κB和MAPKs/AP－1信号通路相关蛋白的表达，抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

• rigosertib联合化疗对Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物突变型结直肠癌小鼠的疗效和不良反应

  张昊晨,周欣毅,富栋梁,丁雨薇,肖乾,袁瑛

  目的 探讨rigosertib(RGS)与结直肠癌经典化疗药物联合对KRAS突变型结直肠癌的疗效及不良反应。方法 通过裸鼠皮下接种构建KRAS突变型结直肠癌模型，采用随机数字表法及随机数余数法随机分为对照组、RGS组、5－氟尿嘧啶(5－FU)组、奥沙利铂(OXA)组、伊立替康(IRI)组、5－FU+RGS组、OXA+RGS组和IRI+RGS组，观察各组小鼠体重和肿瘤体积的变化，采用免疫组化染色、原位末端标记荧光染色、Western blot法检测肿瘤组织增殖抑制及凋亡情况，通过小鼠血常规、血生化及肝脏组织切片HE染色分析化疗联合RGS的不良反应情况。采用细胞计数试剂盒8检测OXA与RGS联用对KRAS突变型结直肠癌细胞DLD1和HCT116的协同作用。结果 对照组、RGS组、5－FU组、OXA组、IRI组、5－FU+RGS组、OXA+RGS组和IRI+RGS组小鼠移植瘤均成瘤，肿瘤生长快慢不一，其中OXA+RGS组肿瘤增长较慢。到给药后55 d，OXA+RGS组的肿瘤体积倍数为37.019±8.634，均小于RGS组(77.571±15.387， ＝0.029)和OXA组(92.500±13.279， ＝0.008)，具有协同效应。免疫组化染色显示，对照组、OXA组、RGS组和OXA+RGS组小鼠移植瘤组织Ki－67指数分别为(100.0±16.8)%、(35.6±11.3)%、(54.5±18.1)%和(15.4±3.9)%，OXA+RGS组低于对照组( ＝0.014)，但与OXA组和RGS组比较差异无统计学意义(均 >0.05)。TUNEL荧光染色结果显示，OXA+RGS组凋亡细胞荧光信号强度为3.878±0.547，高于OXA组(1.515±0.442， ＝0.005)和RGS组(1.966±0.261， ＝0.008)。Western blot检测结果显示，OXA+RGS组小鼠移植瘤组织中cleaved－PARP、cleaved－caspase 3和cleaved－caspase 8等凋亡相关蛋白表达量均高于对照组、OXA组和RGS组。裸鼠接受RGS、5－FU、OXA、IRI等单药和联合治疗后，未见明显肝肾功能损害，但OXA+RGS组白细胞为(0.385±0.215)×10 /L，血红蛋白为(56.000±24.000)g/L，均低于对照组[分别为(5.598±0.605)×10 /L和(153.333±2.231)g/L，均 <0.01]。 结论 RGS与5－FU、IRI联用治疗KRAS突变型结直肠癌不能增强疗效，但与OXA联用具有更强的抗肿瘤效应。RGS单药不会对小鼠造成明显的骨髓抑制和肝肾功能损伤，但与OXA联用不良反应可能会相应增加。

• 焦亡通路基因的遗传变异与直肠癌患者术后同步放化疗不良反应相关

  陈红霞,任宁馨,杨洁,陈进娜,陆启璇,冯燕茹,黄莹,尹露茜,林东昕,李晔雄,金晶,谭文

  目的 探讨焦亡通路关键基因的遗传变异与直肠癌患者术后同步放化疗不良反应的关系。方法 抽取2005年1月至2015年6月中国医学科学院肿瘤医院347例Ⅱ~Ⅲ期直肠癌患者术后同步放化疗治疗前的外周血，提取DNA，采用Sequenom MassARRAY方法检测焦亡通路中的黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)、半胱天冬酶1(CASP1)、CASP4、CASP5、CASP11、消皮素D (GSDMD)、消皮素E(GSDME)和含Nod样受体家族pyrin域蛋白3(NLRP3)共8个关键基因的43个标签单核苷酸多态(htSNP)的基因分型，采用非条件logistic回归模型分析htSNP基因型与直肠癌患者术后同步放化疗不良反应发生的关系。结果 347例患者术后接受持续5周的术后同步放化疗，发生中重度骨髓抑制101例(29.1%)，发生中重度腹泻156例(45.0%)，发生中重度放射性皮炎66例(19.0%)。手术方式、病灶距齿状线距离与直肠癌患者术后同步放化疗发生中重度腹泻和放射性皮炎有关(均 0.05)。 结论 焦亡通路相关基因CASP4、CASP11、GSDME和NLRP3的遗传变异与Ⅱ~Ⅲ期直肠癌患者术后同步放化疗的不良反应发生有关，可能是直肠癌个体化治疗的潜在遗传标志物。

• 食管全周浅表鳞状细胞癌和癌前病变浸润深度与脉管瘤栓的危险因素分析

  刘奕,窦利州,薛学敏,刘勇,贺舜,张月明,柯岩,刘旭东,郭嫦媛,薛丽燕,王贵齐

  目的 探讨食管全周浅表鳞状细胞癌和癌前病变发生黏膜下深浸润及脉管瘤栓的危险因素。方法 2013年11月至2021年10月在中国医学科学院肿瘤医院行内镜下切除术的食管鳞状上皮高级别上皮内瘤变20例，食管鳞状细胞癌96例。分析其临床病理特征和内镜下表现，病变发生黏膜下深浸润和脉管瘤栓的影响因素分析采用logistic回归模型。结果 116例患者中，术后病理诊断为高级别上皮内瘤变至黏膜下层浅浸润(<200 μm)85例(其中高级别上皮内瘤变20例)，黏膜下层深浸润(≥200 μm)31例，有脉管内瘤栓17例。多因素logistic回归分析显示，饮酒史(＝3.090，95% ：1.165~8.200)、病变处食管上皮乳头内毛细血管袢AB分型(＝11.215, 95% ：3.955~31.797)是浸润深度的独立影响因素，吸烟史(＝5.824，95% ：1.704~19.899)、是否存在无血管区或血管杂乱区域(＝3.393，95% ：1.285~12.072)是脉管瘤栓的独立影响因素。结论 有饮酒史、病变处食管上皮乳头内毛细血管袢分型为B2~B3型的食管全周浅表鳞状细胞癌及癌前病变发生黏膜下层深浸润的风险更高，有吸烟史、存在无血管区或血管杂乱区域的食管全周浅表鳞状细胞癌及癌前病变有脉管瘤栓的可能性更大。超声内镜联合窄带成像+放大内镜检查能提高术前对食管全周浅表鳞状细胞癌及癌前病变浸润深度和脉管瘤栓评估的准确性，帮助内镜医师合理地把握内镜下治疗的指征。

• 食管鳞状细胞癌预后不良的影响因素及炎性反应指标对食管鳞状细胞癌术后复发的预测价值

  王新,王铮,卢万里,赵高峰

  目的 探讨食管鳞状细胞癌预后不良的影响因素及中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、单核细胞与淋巴细胞比值(MLR)与分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目等炎性反应指标对食管鳞状细胞癌术后复发的预测价值。方法 选取2017年2月至2019年2月在南阳市中心医院行根治术治疗的130例食管鳞状细胞癌患者，按照预后效果分为预后良好组(66例)和预后不良组(64例)。收集其临床资料和随访资料。采用多因素logistic回归分析确定患者预后不良的独立影响因素，采用Spearman相关分析明确术前NLR、PLR和MLR与分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目的相关性，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析评价NLR、PLR和MLR预测食管鳞状细胞癌预后不良的效能。结果 单因素分析显示，分化程度、浸润程度、淋巴结转移数目与食管鳞状细胞癌患者的预后有关(均 <0.05)。多因素logistic回归分析显示，分化程度、浸润深度和淋巴结转移数目均为食管鳞状细胞癌患者预后不良的独立影响因素，中分化( ＝2.603，95% ：1.009~6.715)或低分化( ＝9.909，95% ：3.097~31.706)、浸润到纤维膜( ＝14.331，95% ：1.333~154.104)或周围组织( ＝23.368，95% ：1.466~372.578)、淋巴结转移数目≥3枚( ＝9.225，95% ：1.693~50.263)的患者患者预后不良。Spearman相关分析显示，NLR与分化程度、淋巴结转移数目呈负相关( ＝－0.281， ＝0.001； ＝－0.257， ＝0.003)，PLR与分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目呈负相关( ＝－0.250， ＝0.004； ＝－0.197， ＝0.025； ＝－0.194， ＝0.027)，MLR与分化程度、淋巴结转移数目呈正相关( ＝0.248， ＝0.004； ＝0.196， ＝0.025)。ROC曲线分析显示，NLR、PLR和MLR预测食管鳞状细胞癌预后不良的曲线下面积分别为0.971、0.925和0.834。NLR的最佳界值为2.87，预测食管鳞状细胞癌预后不良的灵敏度为90.6%，特异度为87.9%。PLR的最佳界值为141.75，预测食管鳞状细胞癌预后不良的灵敏度为92.2%，特异度为87.9%。MLR的最佳界值为0.40，预测食管鳞状细胞癌预后不良的灵敏度为54.7%，特异度为100.0%。 结论 分化程度、浸润程度、淋巴结转移数目与食管鳞状细胞癌预后不良密切相关，NLR、PLR和MLR能为食管鳞状细胞癌预后不良预测提供重要信息。

• 人表皮生长因子受体2瘤内异质性乳腺癌的病理学特征和免疫微环境

  杨壹羚,宋园明,薛慧琴,孙卉,李崖青,钱晓龙,焦娇,李鲲鹏,张恒,郭晓静

  目的 探讨人表皮生长因子受体2(HER-2)瘤内异质性乳腺癌的病理学特征，及肿瘤免疫微环境与HER-2瘤内异质性的关系。方法 2017年11月至2020年6月天津医科大学肿瘤医院收治的HER-2瘤内异质性乳腺癌30例，采用免疫组化技术(IHC)检测肿瘤组织中HER-2的表达，采用双色银染原位杂交技术(D-SISH)验证HER-2的状态，划分瘤内HER-2阳性区域和阴性区域，分别评估病理学特征、分子分型以及肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)和程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达。结果 30例HER-2瘤内异质性乳腺癌中，HER-2阳性细胞百分比为10%~90%。病理类型以非特殊类型浸润性癌为主，其中6例患者HER-2阳性区域与阴性区域的病理类型不同，HER-2阳性区域2例病理类型为特殊类型的患者均为大汗腺癌，HER-2阴性区域4例病理类型为特殊类型的患者包括2例浸润性微乳头状癌，1例浸润性乳头状癌，1例大汗腺癌。HER-2阳性区域腔上皮B型17例，HER-2过表达型13例；HER-2阴性区域腔上皮B型22例，三阴性型8例。HER-2阳性区域和阴性区域中TILs高水平的患者分别占53.3%(16/30)和26.7%(8/30)，差异有统计学意义(＝0.035)。HER-2阳性区域和HER-2阴性区域PD-L1表达阳性者分别为6例和9例。8例HER-2阴性区域含三阴性成分的乳腺癌中，4例PD-L1表达阳性。结论 针对HER-2瘤内异质性乳腺癌，病理医师需要同时关注HER-2阳性区域和阴性区域，并尽可能分别评估分子分型。对于含有三阴性成分的HER-2瘤内异质性乳腺癌，可通过细化PD-L1的瘤内表达情况优化治疗方式。

• 化疗联合程序性死亡蛋白1抗体治疗在食管鳞状细胞癌新辅助治疗真实世界中的疗效及安全性

  吴浦嫄,王涛,陈宝俊,史敏科,黄斌,吴楠蝶,祁亮,常小峰,王立峰,刘宝瑞,任伟

  目的 评估真实世界中新辅助化疗联合程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体治疗对局部晚期可切除、边界或潜在可切除食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)的有效率和安全性。方法 2020年4月至2021年3月在南京大学医学院附属鼓楼医院行化疗联合PD-1抗体新辅助治疗的局部晚期可切除、边界或潜在可切除食管鳞癌患者28例，根据美国癌症联合会第8版临床TNM分期标准，Ⅱ期、Ⅲ期、ⅣA期、ⅣB期和分期不明者分别有1、15、10、1和1例。治疗方案为紫杉类药物与铂类药物或氟尿嘧啶的双药化疗联合PD-1抗体治疗。2个周期后对患者进行疗效评估，并对适合手术者行手术治疗。结果 28例患者中，分别有1、21、5和1例患者完成了1、2、3、4个周期化疗联合PD-1抗体治疗。客观缓解率为71.4%(20/28)，疾病控制率为100%(28/28)。3级以上不良反应发生率为21.4%(6/28)，其中中性粒细胞减少3例，白细胞减少1例，血小板减少1例，免疫性肝炎1例。无治疗相关死亡。23例患者完成了手术治疗，R0切除率为87.0%(20/23)，其中13例患者术后病理分期降至Ⅰ期，病理完全缓解率为17.3%(4/23)，原发灶病理完全缓解率为21.7%(5/23)。4例在完成新辅助治疗后行根治性放化疗，1例达到部分缓解后拒绝后续治疗。结论 对于局部晚期可切除、边界或潜在可切除食管鳞癌患者，新辅助化疗联合PD-1抗体治疗有效率高，安全性良好，是一种有潜力的治疗方式。

• 不可手术局部浸润性膀胱癌保膀胱综合治疗疗效分析

  仲思锦,高俊俊,唐平,刘跃平,王淑莲,房辉,裘敬平,宋永文,陈波,亓姝楠,唐源,卢宁宁,景灏,翟医蕊,周爱萍,毕新刚,马建辉,李长岭,张勇,寿建忠,邢念增,李晔雄

  目的 评价局限于盆腔的浸润性膀胱癌保膀胱综合治疗的疗效及不良反应，探讨预后影响因素。方法 1999年3月至2021年12月在中国医学科学院肿瘤医院接受保膀胱综合治疗的浸润性膀胱癌患者69例，均接受放疗，其中42例接受同步化疗，32例接受新辅助化疗，43例放疗前接受过经尿道膀胱肿瘤电切术。随访观察患者的晚期放疗不良反应、膀胱功能、肿瘤复发转移和生存情况，采用Cox模型进行预后影响因素的多因素分析。结果 69例患者的中位年龄为69岁，其中尿路上皮癌63例；Ⅲ期64例，Ⅳ期4例。中位随访76个月，晚期泌尿道反应2级7例，消化道反应2级2例，无3级及以上不良反应发生。除8例因膀胱内肿瘤未控失去膀胱功能外，其余患者均保持了正常膀胱功能。局部复发17例。同步放化疗组11例，局部复发率为26.2%(11/42)，非同步放化疗组6例，局部复发率为22.2%(6/27)，两组局部复发率差异无统计学意义( ＝0.709)。远处转移23例(包括2例局部复发伴远转)，其中同步放化疗组10例，远处转移率为23.8%(10/42)，非同步放化疗组13例，远处转移率为48.1%(13/27)，非同步放化疗组的远处转移率高于同步放化疗组( ＝0.036)。69例患者的中位总生存时间为59个月，5年总生存率为47.8%；中位无进展生存时间为20个月，5年无进展生存率为34.4%。同步放化疗和非同步放化疗患者的5年总生存率分别为62.9%和27.6%( <0.001)，5年无进展生存率分别为45.4%和20.0%(( ＝0.022)。有无新辅助化疗患者的5年总生存率分别为78.4%和30.1%( ＝0.002)，5年无进展生存率分别为49.1%和25.1%( ＝0.087)。放疗前有无局部电切患者的5年总生存率分别为45.5%和51.9%( ＝0.233)，5年无进展生存率分别为30.8%和39.9%( ＝0.198)。多因素Cox回归分析显示，临床分期( ＝0.422，95% ：0.205~0.869)是浸润性膀胱癌患者无进展生存的独立影响因素，临床分期( ＝0.278，95% ：0.114~0.678)、同步化疗( ＝0.391，95% ：0.165~0.930)、新辅助化疗( ＝0.188，95% ：0.058~0.611)、复发( ＝10.855，95% ：3.655~32.238)是浸润性膀胱癌患者总生存的独立影响因素。 结论 不可手术局部浸润性膀胱癌通过放疗为主的保膀胱综合治疗可取得满意的远期疗效，大部分患者可保留正常膀胱功能，晚期不良反应可接受，其中早期、同步放化疗、新辅助化疗的患者改善生存尤为明显。

• 免疫检查点抑制剂相关肺炎患者临床与胸部CT特点

  张倩,赵世俊,王书航,陶秀丽,吴宁

  目的 探讨免疫检查点抑制剂相关肺炎(CIP)的临床和胸部CT特点及炎症转归。方法 回顾性分析2017年8月至2021年4月中国医学科学院肿瘤医院收治的恶性肿瘤患者中38例CIP患者的临床和影像资料，随访观察炎症转归情况。结果 38例CIP患者自免疫检查点抑制剂(ICIs)用药至发生CIP的中位时间为72.5 d，22例患者于用药后3个月内发生CIP。24例肺癌患者中位CIP发生时间为54.5 d，早于非肺癌患者(119.0 d)，但差异无统计学意义( ＝0.138)。34例(89.5%)患者发生CIP时伴有症状，常见症状包括咳嗽(29例)、呼吸困难(27例)。CIP胸部CT炎症分布表现为不对称分布31例，对称分布7例。24例肺癌患者中，16例炎症主要分布在肺癌原发灶同侧，8例呈全肺弥漫分布。磨玻璃影(37例)和实变(30例)为常见的影像表现。CIP分类以机化性肺炎型最多见(15例)。在30例随访时间>1个月的患者中，17例CIP完全吸收(完全吸收组)，13例部分吸收或稳定(未完全吸收组)。完全吸收组中位CIP发生时间为55 d，短于未完全吸收组(128 d， ＝0.022)。与未完全吸收组相比，完全吸收组实变较少( ＝0.010)，CIP分类均为过敏性肺炎型( ＝0.004)。 结论 CIP多在ICIs用药后3个月内出现，临床和影像表现缺乏特异性。影像特点对预测炎症转归有重要意义。