中华肿瘤杂志

中华肿瘤杂志2023年第05期

• 钙结合蛋白S100A7通过上皮－间质转化促进宫颈癌细胞侵袭迁移

  田甜,华震,孔琰,王灵芝,刘翔宇,韩毅,周学敏,崔竹梅

  目的 探讨S100A7通过细胞内外作用影响宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法 收集2007年5月至2007年12月在青岛大学附属医院妇科行手术治疗的5例宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)和3例腺癌组织标本，采用免疫组化SP法检测其S100A7蛋白的表达。通过慢病毒包装系统构建过表达S100A7的宫颈癌细胞HeLa和C33A，作为实验组，采用免疫荧光实验观察过表达S100A7宫颈癌细胞的形态变化，Transwell实验检测S100A7对宫颈癌细胞迁移和侵袭的影响，实时荧光定量聚合酶链反应(RT－qPCR)检测宫颈癌细胞上皮－间质转化标志分子E－cadherin、N－cadherin、vimentin和fibronectin mRNA的表达。收集宫颈癌细胞条件培养基，采用Western blot法检测细胞外S100A7蛋白的表达。将收集的细胞条件培养基加入Transwell下层小室，检测细胞外S100A7对宫颈癌细胞运动能力的影响。分离纯化C33A细胞培养上清的外泌体，采用Western blot法检测S100A7、CD81和肿瘤易感基因101的表达。将外泌体和宫颈癌细胞共孵育进行Transwell实验，检测实验组和对照组外泌体对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 S100A7蛋白在宫颈鳞癌组织中呈阳性表达，在宫颈腺癌组织中不表达。成功构建稳定过表达S100A7的HeLa和C33A细胞。实验组C33A细胞呈梭形间叶性细胞形态，对照组细胞则趋向于多边形上皮样形态。实验组HeLa细胞Transwell迁移实验和侵袭实验的穿膜细胞数分别为(152.00±39.22)个和(115.38±34.57)个，均高于各自对照组[(105.13±15.75)个和(79.50±13.68)个，均<0.05]；实验组HeLa和C33A细胞中E－cadherin mRNA的表达均下降(均<0.05)；实验组HeLa细胞中N－cadherin和fibronectin mRNA的表达、实验组C33A细胞中fibronectin mRNA的表达均增高(均<0.05)。Western blot检测结果显示，实验组HeLa细胞的培养上清中检测到S100A7蛋白表达。加入实验组条件培养基的HeLa细胞迁移实验和侵袭实验穿膜细胞数分别为(192.60±24.41)个和(105.40±27.38)个，明显高于对照组[(98.80±47.24)个和(84.50±13.51)个，均<0.05]。成功提取C33A细胞培养上清中的外泌体，S100A7表达阳性。与实验组细胞提取的外泌体共孵育的C33A细胞迁移实验和侵袭实验的穿膜细胞数分别为(251.00±49.82)个和(524.60±52.74)个，明显高于对照组[(143.00±30.85)个和(389.00±63.23)个，均<0.05]。结论 S100A7介导宫颈癌细胞发生上皮－间质转化，并可在外泌体中发挥作用，促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭。

• 基于配对样本间的聚鸟嘌呤基因型差异构建结直肠癌系统进化树

  高鑫,于涛,张琦,张师垚,黄迪,赵信禹,刘刚

  目的 探讨结直肠癌(CRC)原发灶和淋巴结转移灶的肿瘤内异质性空间分布及其与转移的关系。方法 2017年1—12月在天津医科大学总医院普通外科接受手术切除并伴有区域淋巴结转移的原发性CRC患者20例。对患者手术切除组织的蜡块进行连续切片，经Histogene染色后行显微切割，获取原发肿瘤组织样本、淋巴结转移组织样本和正常组织样本。提取DNA，采用多重PCR扩增及毛细管电泳检测配对样本的聚鸟嘌呤(Poly－G)基因型。分析临床病理特征与Poly－G突变频率的关系。基于配对样本间的Poly－G基因型差异计算距离矩阵，构建CRC系统进化树。结果 共检测20例患者的237个样本，其中134个原发肿瘤组织样本，66个淋巴结转移组织样本，37个正常组织样本，每例患者均检测出Poly－G突变。肿瘤低、未分化患者的Poly－G突变频率[(74.10±23.11)%]高于高、中分化患者[(31.36±12.04)%， 0.05)。基于配对样本的Poly－G基因型差异构建了20例患者的系统进化树，能明确显示患者肿瘤的进化过程和淋巴结转移的亚克隆来源。 结论 CRC原发灶和淋巴结转移灶的肿瘤内异质性普遍存在。Poly－G突变积累于CRC的发生发展过程中，并广泛存在于CRC的原发灶和淋巴结转移灶，可作为遗传标志物构建系统进化树，高效、便捷地展示CRC肿瘤内异质性的空间分布和转移途径。

• 基于肿瘤微环境构建新型共培养肝癌模型

  齐翠萍,王迪,魏秀红,张波,武敬亮

  目的 构建由激活肝星状细胞(aHSC)和肝癌细胞组成的新型共培养肝癌研究模型，探究其与传统模型的药效差异，以建立能够反映临床真实药效的体内外肝癌研究模型。方法 构建由激活肝星状细胞(aHSC)和肝癌细胞组成的新型共培养肝癌研究模型，通过细胞毒性实验、细胞迁移实验、药物滞留实验以及体内抑瘤实验比较新型共培养模型与传统单细胞模型在药效上的差异，并采用Western blot检测耐药蛋白P－gp和上皮－间质转化相关蛋白，Masson染色观察荷瘤小鼠肿瘤组织中的胶原纤维沉积情况，CD31免疫组化染色观察荷瘤小鼠肿瘤组织中的微血管密度。结果 单细胞模型和共培养模型的细胞毒性均存在药物浓度依赖性，随着姜黄素(CUR)浓度升高细胞存活率降低，但单细胞模型比共培养模型细胞存活率下降得更快。当CUR浓度为10 μg/ml时，共培养模型的细胞存活率为62.3%，迁移率为(28.05±3.68)%，均高于单细胞模型[38.5%和(14.91±5.92)%，均 <0.05]。Western blot检测显示，共培养模型中P－gp和vimentin表达上调，分别为单细胞模型的1.55倍和2.04倍；E－cadherin表达下调，单细胞模型中E－cadherin表达水平是共培养模型的1.17倍。药物滞留实验显示，共培养模型能促进药物外排，减少药物滞留。体内抑瘤实验显示，m－HSC+H22共移植模型比H22单细胞移植模型小鼠肿瘤增长快，肿瘤体积大。给予CUR治疗后，m－HSC+H22共移植模型和H22单细胞移植模型小鼠肿瘤增长均受到抑制。Masson染色显示，m－HSC+H22共移植模型小鼠的肿瘤组织中胶原纤维沉积多于H22单细胞移植模型。CD31免疫组化染色显示，m－HSC+H22共移植模型小鼠肿瘤组织中的微血管密度高于H22单细胞移植模型。 结论 aHSC+肝癌细胞共培养模型增殖和转移能力强，易耐药，与肝癌的临床治疗表现相似，是一种优于传统单细胞模型的新型肝癌治疗研究模型。

• T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域表达与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系及临床意义

  李莉,王利利,周菊英

  目的 探讨T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA)的表达与宫颈鳞状细胞癌(CSCC)发生发展的关系，及对CSCC患者预后的影响。方法 收集2014年3月至2019年4月苏州大学附属第一医院收治的116例CSCC、23例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、23例CINⅡ~Ⅲ级和23例慢性宫颈炎患者的宫颈组织标本，采用免疫组化SP法检测VISTA的表达。通过随访获取CSCC患者的生存资料，采用Kaplan－Meier法进行生存分析，组间生存率比较采用Log rank检验。预后影响因素分析采用多因素Cox比例风险模型。结果 CSCC组VISTA表达阳性率为32.8%(38/116)，CINⅡ~Ⅲ级组阳性率为17.4%(4/23)，CINⅠ级组和慢性宫颈炎组VISTA表达均为阴性。CSCC组与CINⅡ~Ⅲ级组、CINⅠ级组及慢性宫颈炎组比较，差异均有统计学意义(均<0.01)。在116例CSCC患者中，VISTA表达与CSCC患者的国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移有关(均<0.01)。VISTA阳性表达组患者平均生存时间为30.7个月，3年生存率为44.7%(17/38)；而VISTA阴性表达组患者平均生存时间为49.1个月，3年生存率为87.2%(68/78)。多因素Cox回归分析显示，VISTA表达(＝0.001)和FIGO分期(＝0.047)为CSCC患者预后的独立影响因素，VISTA阳性表达患者的死亡风险是VISTA阴性表达患者的4.130倍。结论 VISTA蛋白在CSCC组织中高表达，其表达水平与CSCC的发生发展密切相关。VISTA表达可作为CSCC预后的独立预测因子，为CSCC免疫检查点抑制剂治疗提供有力依据。

• 不同检测标志物在宫颈腺癌中的诊断和预后预测价值评估

  张倡宁,刘潇阳,李青,宋益哲,刘彬,阴建,杨敬红,钟理,孙力,张询,陈汶

  目的 研究不同检测标志物在宫颈腺癌组织学类型中的诊断价值，及其对患者预后的预测价值。方法 纳入2005—2010年中国医学科学院肿瘤医院宫颈腺癌患者54例，根据2018年国际宫颈腺癌分类标准将宫颈腺癌分为人乳头瘤病毒(HPV)相关性腺癌(HPVA)和非HPV相关性腺癌(NHPVA)。采用全组织切片聚合酶链反应(WTS－PCR)检测宫颈腺癌组织中的高危型人乳头瘤病毒(HR－HPV)DNA，E6/E7 mRNA原位杂交(ISH)技术检测HR－HPV E6/E7 mRNA。随机选取15例WTS－PCR检测阳性的组织样本进行激光显微切割聚合酶链反应(LCM－PCR)，验证WTS－PCR和E6/E7 mRNA ISH两种检测方法的准确性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析标志物鉴别HPVA和NHPVA的效能。对宫颈腺癌患者预后影响因素进行单因素分析和多因素Cox比例风险模型回归分析。结果 54例宫颈腺癌患者中，30例为HPVA，24例为NHPVA。HPVA患者的HR－HPV DNA阳性率为96.7%(29/30)，HR－HPV E6/E7 mRNA阳性率为63.3%(19/30)；NHPVA患者的HR－HPV DNA阳性率为33.3%(8/24)，HR－HPV E6/E7 mRNA阳性率为0(0/24)，差异均有统计学意义(均 <0.001)。LCM－PCR检测结果显示，5例患者腺上皮病变区域HR－HPV DNA阳性，余均阴性，与E6/E7 mRNA ISH检测结果一致性强( ＝0.842， ＝0.001)。ROC曲线分析显示，HR－HPV DNA、HR－HPV E6/E7 mRNA和p16表达鉴别HPVA和NHPVA的AUC分别为0.817、0.817和0.692，灵敏度分别为96.7%、63.3%和80.0%，特异度分别为66.7%、100.0%和58.3%。HR－HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的AUC高于p16表达( ＝0.044)。HR－HPV DNA(WTS－PCR检测)阳性与阴性患者的生存率差异无统计学意义( ＝0.156)，而HR－HPV E6/E7 mRNA阳性与阴性患者、p16表达阳性与阴性患者的生存率差异均有统计学意义(均 <0.05)。多因素Cox回归分析显示，国际妇产科联盟分期( ＝19.875，95% ：1.526~258.833)和宫旁受累( ＝14.032，95% ：1.281~153.761)是宫颈腺癌患者预后的独立影响因素。 结论 HPV E6/E7 mRNA更能反映宫颈腺癌组织中HPV的感染情况。HR－HPV E6/E7 mRNA与HR－HPV DNA(WTS－PCR检测)鉴别HPVA和NHPVA的效能相近，HR－HPV DNA的灵敏度较高，而HR－HPV E6/E7 mRNA的特异性较高，HR－HPV DNA鉴别HPVA和NHPVA的效能优于p16表达。HR－HPV E6/E7 mRNA和p16表达阳性宫颈腺癌患者的生存率均优于阴性患者。

• T1N3期和T3N0期乳腺癌组织中M1型巨噬细胞的浸润及意义

  雷荟仔,袁培,贾佳,郭嫦媛,王冰凝,郭蕾,应建明

  目的 探讨T1N3期和T3N0期乳腺癌免疫微环境的差异及M1型巨噬细胞浸润与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法 从国际乳腺癌协会分子分类(METABRIC)数据库中提取9例T1N3期和11例T3N0期乳腺癌患者的RNA－Seq测序数据和临床数据，采用CIBERSORT反卷积算法计算乳腺癌组织中22种浸润性免疫细胞的占比，比较T1N3期和T3N0期乳腺癌组织中免疫细胞浸润的差异。收集2011—2022年间在中国医学科学院肿瘤医院行根治性手术切除的乳腺癌组织标本，T1N3期77例，T3N0期58例，采用免疫组化双染技术检测组织中M1型巨噬细胞的细胞密度，以验证基于METABRIC数据库资料的分析结果。结果 对METABRIC数据库资料的分析显示，在T1N3期乳腺癌组织中占比最高的浸润性免疫细胞为M1巨噬细胞，占15.85%；在T3N0期乳腺癌组织中占比最高的浸润性免疫细胞为M2巨噬细胞，占13.07%。T1N3期和T3N0期样本中M1巨噬细胞的占比差异有统计学意义(＝0.010)。乳腺癌组织标本的免疫组化双染检测结果显示，T1N3期和T3N0期乳腺癌组织中M1型巨噬细胞的中位细胞密度分别为62.0和38.0个/mm，差异有统计学意义(＝0.002)。结论 M1型巨噬细胞在T1N3期乳腺癌患者中密度升高，M1型巨噬细胞的浸润与乳腺癌的淋巴结转移有关。

• 恶性胸膜间皮瘤列线图预后预测模型的建立及验证

  谢晓洁,陈建有,江杰,段慧,武毅,张兴文,杨晟杰,赵雯,沈莎莎,吴莉,何波,丁莹莹,罗恒,刘思耘,韩丹

  目的 建立恶性胸膜间皮瘤(MPM)临床预后预测模型模型。方法 2007年3月至2020年5月于楚雄彝族自治州人民医院、昆明医科大学第一附属医院和昆明医科大学第三附属医院经病理确诊的MPM患者210例，根据首次入院时间将患者分为训练集(112例)和验证集(98例)。收集患者的人口学、症状、病史、临床评分及分期、血常规及血生化、肿瘤标志物、病理、治疗等8个方面36项指标的信息资料，采用Cox比例风险模型对训练集112例患者进行预后影响因素分析。根据多因素Cox回归分析结果，建立生存列线图预测模型。采用C指数和校准曲线在训练和验证集中评估列线图预测模型的区分度和校准度。以训练集患者风险评分的中位数为界值分别将训练集和验证集患者划分为高风险组和低风险组，采用Log rank检验比较两组的生存率。结果 210例MPM患者的中位总生存时间为384 d(IQR＝472 d)，6个月、1年、2年和3年生存率分别为75.7%、52.6%、19.7%和13.0%。Cox多因素回归分析结果显示，居住地( ＝2.127，95% ：1.154~3.920)、血清白蛋白( ＝1.583，95% ：1.017~2.464)、临床分期(Ⅳ期： ＝3.073，95% ：1.366~6.910)和有无化疗( ＝0.476，95% ：0.292~0.777)为MPM患者预后的独立影响因素。基于Cox多因素回归分析结果建立的MPM患者生存列线图预测模型在训练集和验证集中的C指数分别为0.662和0.613。训练集和验证集的校准曲线显示，MPM患者6个月、1年和2年的预测生存概率与实际生存率的一致性尚可。在训练集和验证集中，低风险组患者的生存率均高于高风险组( 值分别为0.001和0.003)。 结论 基于临床常规指标建立的MPM患者生存列线图预测模型为该病的临床预后判断及风险分层提供了可靠的工具。

• 腹腔积液诊断卵巢浆液性癌的细胞病理学特征分析

  常艳华,邹冰清,蔡颖,杨树东,张阳,梁加贝,李苁

  目的 分析总结卵巢浆液性癌(SOC)腹腔积液中肿瘤细胞的病理形态学及免疫细胞化学特点。方法 采集2015年1月至2021年7月南京医科大学附属无锡人民医院收治的61例肿瘤患者的浆膜腔积液标本，包括32例SOC、10例胃肠道腺癌、5例胰腺导管腺癌、6例肺腺癌、4例良性间皮增生和1例恶性间皮瘤患者的腹腔积液，2例恶性间皮瘤患者的胸腔积液，1例恶性间皮瘤患者的心包积液，离心后制成常规涂片，将剩余积液离心后制成细胞蜡块并行常规HE染色和免疫细胞化学染色，分析其细胞形态学和免疫细胞化学特点。抽取患者空腹肘静脉血5 ml，检测血清肿瘤标志物糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19－9(CA19－9)的水平。结果 32例SOC患者中，5例为低级别浆液性癌(LGSOC)，27例为高级别浆液性癌(HGSOC)。29例(90.6%)SOC患者血清CA125增高，但与纳入研究的非卵巢原发病变患者间差异均无统计学意义(均>0.05)；9例胃肠道腺癌和5例肺腺癌患者血清CEA阳性，阳性率高于SOC患者(均<0.001)；5例胃肠道腺癌和5例胰腺导管腺癌患者血清CA19－9阳性，阳性率高于SOC患者(均<0.05)。4例良性间皮增生患者的血清CA125、CEA和CA19－9均在正常范围内。LGSOC肿瘤细胞异型性小，聚集成小簇状或微乳头状，部分患者可见砂砾体；背景细胞较少，以淋巴细胞为主；制成细胞蜡块后，乳头结构更为明显。HGSOC肿瘤细胞异型性大，细胞核增大明显，且大小不等，可相差3倍以上，有时可见到核仁及核分裂象；肿瘤细胞多聚集成巢团状、乳头状及梅花状；背景细胞较多，以组织细胞为主。免疫细胞化学染色显示，AE1/AE3、细胞角蛋白7(CK7)、配对盒基因8(PAX－8)、CA125、肾母细胞瘤基因(WT1)在32例SOC中均为弥漫阳性表达。抑癌基因p53在5例LGSOC中均呈局灶阳性，在23例HGSOC中呈弥漫阳性表达，在另外4例HGSOC中呈阴性表达。胃肠道腺癌和肺腺癌多有手术史，胰腺导管腺癌的肿瘤细胞往往形成较小的细胞巢。间皮源性病变多有特征性"开窗"现象，免疫细胞化学可协助鉴别诊断。结论 结合患者的临床表现、腹腔积液涂片及细胞块中的细胞形态学特点，可为SOC的诊断提供重要的线索，辅以免疫细胞化学检测可进一步提高诊断的准确性。

• 基于二维超声灰阶声像图的直方图分析在甲状腺髓样癌和甲状腺腺瘤鉴别诊断中的价值

  张蕊,王琴,牛丽娟

  目的 探讨基于二维超声灰阶声像图的直方图分析在甲状腺髓样癌(MTC)和甲状腺腺瘤(TA)鉴别诊断中的可行性和价值。方法 收集2015年1月至2021年10月中国医学科学院肿瘤医院收治的86例初诊的MTC患者和100例TA患者的术前超声图像。基于超声医师人工勾画的感兴趣区进行直方图分析，计算平均值、方差、偏度、峰度、 、 、 、 和 。对MTC组和TA组之间直方图参数进行比较并用多因素logistic回归分析筛选独立预测因素。用受试者工作特征(ROC)曲线比较独立预测因素的单独诊断效能和联合诊断效能。 结果 多因素logistic回归分析显示，平均值、偏度、峰度、 是鉴别诊断MTC与TA的独立影响因素(均 <0.05)。MTC组的偏度和峰度(中位数分别为0.67和0.69)明显高于TA组(中位数分别为0.18和0.07)，平均值和(中位数分别为53.01和50.00) 明显低于TA组(中位数分别为73.82和73.50)。平均值、偏度、峰度、 鉴别诊断MTC与TA的ROC曲线下面积为0.654~0.778，平均值、偏度、峰度、 。联合鉴别诊断MTC与TA的ROC曲线下面积为0.826。 结论 基于二维声像图的直方图分析是鉴别MTC与TA的一个有潜能的工具，其中平均值、偏度、峰度、 的联合诊断价值最高。

• 基于CT影像组学模型预测弥漫大B细胞淋巴瘤一线化疗的疗效

  殷满心,苏巧娜,宋鑫,张建新

  目的 探讨CT影像组学预测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)一线化疗疗效的潜在价值。方法 收集2013年1月至2018年5月在山西省肿瘤医院诊治的DLBCL患者的治疗前CT图像和临床资料，根据Lugano 2014疗效评价标准，分为难治性患者(73例)和非难治性患者(57例)。基于患者化疗前的CT图像，每例患者提取850个CT影像组学特征。采用最小绝对收缩与选择算法、单因素和多因素logistic回归分析筛选出与DLBCL一线化疗疗效相关的临床因素和CT影像组学特征，分别建立影像组学模型和列线图模型。采用受试者工作特征曲线(ROC)、校准曲线和临床决策曲线评价模型预测DLBCL一线化疗疗效的临床价值。结果 筛选出6个与DLBCL一线化疗疗效高度相关的CT影像组学特征，其中一阶特征1个、灰度共生矩阵特征1个、灰度依赖矩阵特征3个、邻域灰度差矩阵特征1个，建立相应的影像组学模型，其在训练集和验证集中的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.82和0.73。联合有效临床因素和影像组学评分建立列线图模型，其在训练集和验证集中的AUC分别为0.95和0.91。校准曲线和临床决策曲线显示，列线图模型具有良好的一致性且在DLBCL的疗效评估方面具有较高的临床价值。结论 基于临床因素和影像组学特征建立的列线图模型在预测DLBCL一线化疗疗效方面具有潜在的临床价值。

• 经治恶性胸膜间皮瘤免疫联合治疗临床分析

  赵璨,费凯伦,万蕊,宋丽萍,向平超,段建春

  目的 探讨真实世界中经治恶性胸膜间皮瘤(MPM)患者接受免疫联合治疗的现状、疗效及安全性。方法 收集2016—2021年中国医学科学院肿瘤医院和北京大学首钢医院39例经治MPM患者的临床病理资料，中位随访18.97个月，根据应用免疫检查点抑制剂(ICIs)治疗的情况分为免疫治疗组(19例)和对照组(20例)，分析免疫联合治疗的疗效及安全性。生存分析采用Kaplan－Meier法，生存率的比较采用Log rank检验。结果 免疫治疗组和对照组的客观缓解率(ORR)分别为21.1%和10.0%，疾病控制率(DCR)分别为78.9%和55.0%，差异均无统计学意义(均>0.05)。免疫治疗组中位总生存时间(OS)长于对照组(分别为14.53和7.07个月，＝0.015)，但两组的中位无进展生存时间(PFS)差异无统计学意义(4.80和2.03个月，＝0.062)。单因素分析显示，胸腔积液性质、病理亚型及免疫治疗疗效与MPM患者的PFS和OS均有关(均<0.05)。免疫治疗组不良反应发生率为89.5%(17/19)，最常见的不良反应为血液学毒性(9例)，其次为恶心呕吐(7例)、疲劳(6例)和皮肤损害(6例)。有5例患者出现免疫治疗相关不良反应，均为1~2级。结论 真实世界中，MPM患者多于后线开始接受免疫联合治疗，以联合化疗为主，中位治疗线数为二线。无论与化疗还是抗血管生成治疗联合均有较好的疗效，不良反应可控，具有良好的临床应用价值。

• 晚期胆囊癌伴多发肝转移免疫治疗联合放疗成功转化后手术1例

  杨咏强,陈志刚,赵文露,涂健,田野,危少华,陈伟

  null 患者男，68岁，2019年4月因反复低热半年余至我院就诊。增强CT和MRI检查示，胆囊癌伴肝脏多发转移。超声胃镜检查显示，胆囊弥漫性增厚，向腔内突起形成菜花样新生物。肝脏S4段结节穿刺活检病理诊断为腺癌(图1)。免疫组化：CK7(+)，CK8(－)，CK19(+)，CK20(－)，肝细胞(－)，MUC5AC(－)，CAM5.2(－)，Ki67(+约5%)，CgA(－)，Syn(－)。临床分期为T3N0M1，ⅣB期。经过肝胆胰肿瘤MDT讨论后，于5月17日至9月18日行6周期GEMOX方案化疗。具体用药：吉西他滨1.6 g，第1天和第8天静脉滴注；奥沙利铂200 mg，第1天静脉滴注；21 d为1个周期。10月17日增强CT和MRI检查示，胆囊癌原发病灶及部分肝转移病灶较前明显增大，新发肝门部淋巴结转移。肝脏穿刺活检组织加做免疫组化：MSH2(+)，MLH1(+)，PMS2(+)，MSH6(+)，HER－2(－)，程序性死亡蛋白配体1(programmed death－ligand 1, PD－L1)(+约40%)。二代测序显示，TMB－Low，FGFR2、IDH1/2、BRCA1/2、BRAF、c－MET和NTRK1－3均无突变。经过第2次肝胆胰肿瘤MDT讨论后，决定给予放疗联合免疫治疗和化疗。10月24日至12月2日行放疗，采用6 MV X线适形调强放疗技术，计划靶区(胆囊肿物及周围多发肝转移癌、肝门区转移淋巴结)总照射剂量50.4 Gy，2 Gy/次，共28次。于2019年10月30日至2020年7月3日行11个周期二线程序性死亡蛋白1(programmed death－1, PD－1)抑制剂免疫治疗联合化疗，具体用药：信迪利单抗200 mg，第1天和第8天静脉滴注；替吉奥胶囊60 mg，第1~14天口服，2次/d; 21 d为1个周期。2020年7月13日增强CT和MRI检查示，胆囊壁较前变薄，肝内多发转移消失，肝门部淋巴结转移显示不清(图2)。经过第3次肝胆胰肿瘤MDT讨论后，于2020年7月22日行腹腔镜下胆囊切除术+部分肝脏切除术。术后病理诊断：(胆囊)囊肿伴坏死，符合新辅助治疗后改变，肿瘤退缩分级评分为0分(图3)。2020年8月10日至11月24日行5周期免疫治疗。具体用药：信迪利单抗200 mg，第1天静脉滴注；21 d为1个周期。后定期、规律复查，末次影像学检查时间为2021年7月15日，末次电话随访时间为2022年1月8日，患者无肿瘤复发及转移，总生存时间(overall survival, OS)已超过32个月。