中华肿瘤杂志

作者：姜利时,滕伟,仇文进,凌园果,石学平,龙妮娅,出良钊,刘健

单位：贵州医科大学临床医学院，贵阳　550000,贵州医科大学临床医学院，贵阳　550000,贵州医科大学临床医学院，贵阳　550000,贵州医科大学临床医学院，贵阳　550000,贵州医科大学临床医学院，贵阳　550000,贵州医科大学临床医学院，贵阳　5500002贵州医科大学附属医院神经外科，贵阳550000

关键词：胶质母细胞瘤;趋化素样因子样含MARVEL跨膜结构域3;核因子κB;细胞增殖;细胞迁移

基金：贵州省科技计划项目E2016-2905

目的 探讨趋化素样因子样含MARVEL跨膜结构域3（CMTM3）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞增殖和迁移的影响及可能机制。方法 利用癌症基因组图谱（TCGA）和基因型-组织表达（GTEx）数据库中的CMTM3表达数据，分析CMTM3在GBM组织中的差异表达及其对GBM患者预后的影响。通过对取自2022年11月3日至2023年3月15日贵州医科大学附属医院手术治疗的11例GBM患者的GBM组织和癌旁组织样本进行CMTM3的免疫组化染色和蛋白含量测定、对GBM细胞系U87、U251、LN229和人胶质细胞系NHA进行CMTM3的实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot检测加以验证。利用U251细胞构建沉默和过表达CMTM3的稳转细胞株（sh-CMTM3组和OE-CMTM3组），采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）实验检测CMTM3表达对细胞增殖能力的影响，采用流式细胞术检测CMTM3表达对细胞周期的影响，采用Transwell实验检测CMTM3表达对细胞迁移能力的影响，采用生信分析方法、Western blot检测、核因子κB（NF-κB）激活-核转运实验以及NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵（PDTC）来验证CMTM3对NF-κB通路的影响。最后通过裸鼠皮下成瘤实验观察CMTM3表达对U251细胞在体内生长的影响。结果 生物信息学分析显示，CMTM3在GBM组织中高表达，CMTM3高表达组GBM患者的总生存率和无病生存率均低于CMTM3低表达组（ 值分别为0.010和0.032）。11例GBM组织样本中，有10例CMTM3蛋白的表达量分别高于相应患者的癌旁组织，这10例GBM组织样本中CMTM3蛋白的表达量总体为0.44±0.09，高于癌旁组织中CMTM3蛋白的表达量（0.12±0.02； =6.69， ＜0.001）。只有1例GBM组织组织中CMTM3蛋白的表达量为0.15±0.01，其相应癌旁组织中CMTM3蛋白的表达量为0.17±0.08，差异无统计学意义（ =0.32， =0.750）。RT-qPCR检测结果显示，人胶质细胞NHA中CMTM3 mRNA的表达量为1.0±0.1，GBM细胞U87、LN229和U251中CMTM3 mRNA的表达量分别为2.1±0.3、3.4±0.5和3.7±0.8，均高于NHA细胞（1.0±0.1，均 ＜0.01）。Western blot检测结果显示，GBM细胞U87、LN229和U251中CMTM3蛋白的表达量分别为1.5±0.2、1.8±0.2和1.9±0.1，均高于NHA细胞（0.7±0.2，均 ＜0.01），其中U251细胞中表达水平最高。CCK-8法、流式细胞术、Transwell细胞迁移实验检测结果显示，sh-CMTM3组细胞活性被抑制，G /G 期细胞比例增多（ ＜0.01），S期细胞比例减少（ ＜0.01），细胞迁移数为（233.6±35.5）个，低于sh-NC组（ ＜0.001）；OE-CMTM3组细胞活性增强，G /G 期细胞比例减少（ ＜0.01），S期细胞比例增多（ ＜0.01），细胞迁移数为（1 212.0±20.8）个，高于OE-NC组（ ＜0.001）；OE-CMTM3+PDTC组细胞活性，G 期、S期和G 期细胞比例，细胞迁移数均无明显变化（均 ＞0.05）。Western blot检测和NF-κB激活-核转运实验结果显示，sh-CMTM3组细胞中p-p65/p65比值为0.51±0.04，p-IκBα/IκBα比值为0.39±0.03，均低于sh-NC组（均 ＜0.01），细胞质染色率为（49.29±1.98）%，高于sh-NC组（ ＜0.01）。OE-CMTM3组细胞中p-p65/p65比值为2.27±0.10，p-IκBα/IκBα为2.14±0.15，均高于OE-NC组（均 ＜0.01），细胞质染色率为（18.96±1.44）%，低于OE-NC组（ ＜0.01），OE-CMTM3+PDTC组细胞中p65/p65比值、p-IκBα/IκBα比值和细胞质染色率与OE-NC组差异均无统计学意义（均 ＞0.05）。裸鼠皮下成瘤实验显示，sh-CMTM3组肿瘤体积为（408.9±96.2）mm ，小于sh-NC组（ =0.003），OE-CMTM3组的肿瘤体积为（1 514.5±251.5）mm ，大于OE-NC组（ =0.005）。 结论 在GBM中，CMMT3呈高表达并且CMTM3高表达GBM患者的总生存率和无病生存率降低。CMTM3可以通过NF-κB信号通路来调控U251细胞的增殖和迁移能力。

来源：2025年第02期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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