中华肿瘤杂志

作者：张洪亮,刘昊天,刘俊阳,张超,李婷,廖智超,刘艳成,张净宇,朱锴,李爽,刘金伟,杨吉龙

单位：天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211,天津市天津医院骨与软组织肿瘤科，天津300211

关键词：恶性外周神经鞘瘤;神经鞘胚素;增殖;侵袭;磷脂酰肌醇3-激酶/Akt通路

基金：天津市教委科研计划项目E2021KJ199

目的 探讨神经鞘胚素（ARTN）在恶性外周神经鞘瘤（MPNST）中的表达及其对MPNST细胞恶性行为的影响与作用通路。方法 收集1995年1月至2011年11月于天津医科大学肿瘤医院手术切除的51例MPNST石蜡包埋组织标本，采用免疫组织化学染色检测ARTN蛋白的表达，并分析ARTN蛋白表达与临床病理特征、预后的关系。利用人MPNST细胞系ST-8814（NF-1型）和STS26T（散发型），通过转染ARTN过表达质粒和ARTN小干扰RNA（siRNA）分别构建ARTN过表达和低表达细胞。采用实时定量聚合酶链反应检测ARTN mRNA的表达，Western bolt检测ARTN蛋白及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号通路相关蛋白的表达，细胞计数盒8（CCK-8）法检测细胞增殖能力，细胞侵袭实验检测细胞的侵袭能力。利用STRING数据库检索与ARTN相互作用的通路蛋白，通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析明确其作用通路。使用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002阻断ST-8814和STS26T细胞的PI3K/Akt通路，观察细胞增殖和侵袭能力的变化。结果 51例MPNST组织标本中，ARTN蛋白高表达22例，低表达29例。ARTN蛋白高表达与较大的肿瘤长径和疾病进展（复发或转移）有关（均 ＜0.05）。ARTN蛋白低表达组患者的中位无病生存时间（DFS）为26.2个月，中位总生存时间（OS）为66.9个月。ARTN蛋白高表达组患者的中位DFS为10.7个月，中位OS为53.8个月。Log rank检验结果显示，ARTN蛋白高表达组患者的无进展生存率比低表达组患者差（ =0.027），但两组患者的总生存率差异无统计学意义（ =0.790），Cox回归分析也证实了这一结果。CCK-8法检测结果显示，转染48 h，ARTN过表达组ST-8814和STS26T细胞的吸光度（ ）值分别为1.35±0.01和1.10±0.02，均高于空质粒对照组（1.05±0.01和0.78±0.01，均 ＜0.01），而ARTN siRNA组ST-8814和STS26T细胞的 值分别为0.35±0.01和0.61±0.01，均低于对照siRNA组（0.74±0.01和1.10±0.04，均 ＜0.01）。转染72和96 h亦如此。细胞侵袭实验结果显示，ARTN过表达组ST-8814和STS26T细胞的穿膜细胞数分别为（29.67±2.08）个和（31.67±2.08）个，均高于空质粒对照组［（20.00±1.00）个和（24.33±1.15）个，均 ＜0.01］；ARTN siRNA组ST-8814和STS26T细胞的穿膜细胞数分别为（14.00±2.00）个和（19.33±1.53）个，均低于对照siRNA组［（19.33±2.52）个和（23.33±0.58）个，均 ＜0.05］。KEGG分析结果显示，ARTN与多个肿瘤信号通路相关，尤其是PI3K/Akt信号通路。Western blot结果显示，过表达ARTN可上调ST-8814和STS26T细胞中p-PI3K和p-Akt蛋白表达（均 ＜0.01）；敲低ARTN表达后，p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显下调（均 ＜0.01）。LY294002阻断PI3K/Akt通路后能明显抑制ARTN过表达对ST-8814和STS26T细胞的影响，ARTN过表达+LY294002组ST-8814和STS26T细胞的 值分别为1.09±0.06和0.82±0.01，均低于ARTN过表达组（分别为1.50±0.01和1.29±0.01，均 ＜0.01），细胞侵袭实验的穿膜细胞数分别为（16.67±3.21）个和（19.67±2.31）个，也均少于ARTN过表达组［分别为（29.67±2.08）个和（31.67±2.08）个，均 ＜0.01］。 结论 在MPNST中，ARTN蛋白的高表达与较大的肿瘤长径、疾病进展及较差的DFS有关。ARTN通过PI3K/Akt信号通路促进MPNST细胞的增殖和侵袭。

来源：2025年第02期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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