中华肿瘤杂志

作者：甄书漫,张浩然,司嘉鑫,王佳琪,赵妍,贾云泷,刘丽华

单位：河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　050011,河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　050011,河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　050011,河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　050011,河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　050011,河北医科大学第四医院肿瘤免疫治疗科，石家庄　0500113河北医科大学第四医院胸外科，石家庄　050011

关键词：食管肿瘤;人食管鳞状细胞癌;miR-1-3p;溶质运载体家族7成员11;线粒体自噬

目的 探讨miR-1-3p对人食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞线粒体自噬的影响，并探讨其潜在的分子机制。方法 利用基因表达综合数据库筛选ESCC中差异表达的miRNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常食管上皮细胞HET-1A和ESCC细胞TE1、KYSE30、KYSE150、KYSE410、Eca109中miR-1-3p的表达。使用生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因，采用荧光原位杂交技术检测miR-1-3p的亚细胞定位，双萤光素酶报告基因验证miR-1-3p和溶质运载体家族7成员11（SLC7A11）的靶向关系。使用细胞计数试剂盒8（CCK-8）和流式细胞术分别检测转染miR-1-3p mimic对细胞增殖和凋亡能力的影响，同时过表达SLC7A11，挽救实验证实miR-1-3p/SLC7A11轴的存在。共聚焦显微镜检测线粒体自噬溶酶体变化，透射电镜观察细胞内线粒体自噬现象及线粒体形态变化。Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62的表达。流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位、活性氧（ROS）的变化。使用免疫组化检测133例初治ESCC患者肿瘤组织和115例正常食管上皮组织SLC7A11的表达（来源于上海芯超生物科技有限公司及2022年1月至2023年1月河北医科大学第四医院），分析SLC7A11与患者临床特征及预后的相关性。采用Kaplan-Meier方法进行生存分析，并使用Cox比例风险回归模型进行影响因素分析。结果 ESCC细胞中miR-1-3p的表达水平均低于HET-1A细胞（ ＜0.05），miR-1-3p可靶向调控SLC7A11。转染miR-1-3p mimic可抑制ESCC细胞增殖，CCK-8结果显示miR-1-3p mimic组KYSE30和KYSE410细胞增殖能力（吸光度值分别为2.88±0.24和2.88±0.18）均低于miRNA mimic NC组（3.94±0.27和4.20±0.21，均 ＜0.05），miR-1-3p mimic+SLC7A11-OE组KYSE30和KYSE410细胞增殖能力（吸光度值分别为3.57±0.15和3.60±0.13）均高于miR-1-3p mimic+ EV组（2.54±0.10和2.36±0.16，均 ＜0.05）；并促进其凋亡，流式细胞术结果显示，miR-1-3p mimic组KYSE30和KYSE410细胞凋亡率［分别为（9.22±0.05）%和（6.55±0.37）%］均高于miRNA mimic NC组［（0.81±0.17）%和（1.04±0.12）%， ＜0.001］，miR-1-3p mimic+SLC7A11-OE组KYSE30和KYSE410细胞凋亡率［分别为（0.73±0.04）%和（1.19±0.05）%］均低于miR-1-3p mimic+EV组［（9.83±0.41）%和（6.09±0.17）%， ＜0.001］。同时抑制线粒体自噬（均 ＜0.05）。转染miR-1-3p mimic可下调SLC7A11蛋白的表达和自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比例（ ＜0.05），上调P62蛋白的表达（ ＜0.05），过表达SLC7A11可以挽救这一现象（ ＜0.05）。转染miR-1-3p mimics后细胞内ROS水平升高，线粒体膜电位（JC-1聚合体与单体比值）降低，过表达SLC7A11可以挽救这一现象（均 ＜0.05）。ESCC组织中SLC7A11的表达水平高于正常食管上皮组织（ ＜0.001），且SLC7A11的表达（ =2.15，95% ：1.27～3.65， =0.004）为影响ESCC预后的独立影响因素。 结论 miR-1-3p通过调控SLC7A11抑制ESCC线粒体自噬发挥抑癌作用。

来源：2025年第07期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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