中华肿瘤杂志

作者：武强,詹琳琳,王宇,贺钰超,陈璐,陈子叶,李广涛,刘东明,包旭,刘潇濛,郭华,宋天强

单位：天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津300060,天津医科大学肿瘤医院肝胆肿瘤科，国家恶性肿瘤临床医学研究中心，天津市肿瘤防治重点实验室，天津3000603北京清华长庚医院临床转化科学中心，北京102218

关键词：肝细胞癌;低密度脂蛋白受体相关蛋白;癌胚抗原;血管生成

目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白（LDLR）表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法 从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息，分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原（CEA）和CD31表达水平的相关性。采用短发卡RNA靶基因慢病毒转染的方法，构建LDLR敲降的MHCC-97H和HLE肝癌细胞。通过转录组测序、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测LDLR敲降后肝癌细胞的差异基因及其表达水平变化。通过富集分析明确LDLR参与的基因相关信号通路。通过对肝癌细胞条件培养基中CEA含量的检测评估LDLR对CEA的影响。采用血管生成实验检测LDLR对人脐静脉内皮细胞血管生成能力的影响，以及CEA在LDLR调控血管生成过程中的作用。收集2019年1月至2022年12月于天津医科大学肿瘤医院手术切除的肝癌组织标本176例，采用免疫组织化学染色检测176例肝癌组织中LDLR及146例肝癌组织中CEA和CD31的表达水平，分析肝癌组织中LDLR的表达水平与肝癌组织中CEA和CD31的表达水平、血清CEA和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的相关性。结果 Oncomine数据库分析显示，发生门静脉转移的肝癌患者肝癌组织中LDLR和CEA的表达呈负相关（ =-0.64， =0.001），而CEA和CD31的表达呈正相关（ =0.46， =0.010）；转录组测序结果显示，LDLR敲降组与对照组MHCC-97H细胞的差异表达基因共有1 032个，其中517个基因表达上调，515个基因表达下调。CEA相关细胞黏附分子5（CEACAM5）在LDLR敲降组细胞中上调明显。基因本体论功能富集分析显示，差异基因最明显富集在血管生成的功能上。京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析显示，涉及的相关通路主要包括细胞粘着斑、细胞外基质受体相互作用等。LDLR敲降组条件培养基中CEA含量为43.75±8.43，高于对照组（1.15±0.14， ＜0.001）。血管生成实验结果显示，在5 h，用LDLR敲降组MHCC-97H细胞的条件培养基培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为（295.3±26.4）个、（552.5±63.8）个和（2 239 781.0±138 211.9）平方像素，均高于对照组［分别为（113.3±23.5）个、（194.8±36.5）个和（660 621.0±280 328.3）平方像素，均 ＜0.01］；用LDLR敲降组HLE细胞的条件培养基培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为（245.3±42.4）个、（257.5±20.4）个和（2 535 754.5±249 094.2）平方像素，均高于对照组［分别为（113.3±23.5）个、（114.3±12.2）个和（1 565 456.5±219 259.7）平方像素，均 ＜0.01］；在对照组MHCC-97H细胞条件培养基中加入CEA培养HUVEC细胞形成的血管主结点数、主分段数和网格总面积分别为（178.9±12.0）个、（286.9±12.3）个和（1 966 990.0±126 249.5）平方像素，均高于对照组［分别为（119.7±22.1）个、（202.7±33.7）个和（1 421 191.0±189 837.8）平方像素，均 ＜0.01］。肝癌组织中LDLR的表达与CEA的表达无相关性，与肝癌组织中CD31的表达、血清CEA水平、血清ALT水平均呈负相关（ =-0.167， =0.044； =-0.061， =0.032； =-0.147， =0.05）。肝癌组织中CEA的表达与CD31的表达呈正相关（ =0.192， =0.020），血清CEA水平与血清ALT水平呈正相关（ =0.164， =0.029）。 结论 肝癌细胞敲降LDLR可通过释放CEA促进肝癌血管异常化。

来源：2024年第05期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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