中华肿瘤杂志

作者：马亮亮,张柯,陆江宁,孙立新,遇珑,冉宇靓,孙力超

单位：国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021,国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021国家癌症中心　国家肿瘤临床医学研究中心　中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室，北京　100021

关键词：乳腺肿瘤;三阴性乳腺癌;线粒体移植;细胞增殖;细胞凋亡;细胞干性

基金：国家自然科学基金E82373078

目的 观察正常细胞和三阴性乳腺癌细胞线粒体形态，提取正常细胞线粒体，探讨线粒体移植对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和干性的影响。方法 使用透射电子显微镜观察细胞线粒体形态，用线粒体提取试剂盒提取线粒体，Western blot鉴定线粒体蛋白，线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体活性。用MitoTracker Green或MitoTracker Deep Red荧光探针标记活细胞线粒体，在12、24、96 h用激光共聚焦显微镜观察线粒体进入三阴性乳腺癌LTT细胞的程度；线粒体移植24 h后利用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、平板克隆、流式细胞术、细胞成球实验检测线粒体移植对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡和干性的影响。结果 透射电子显微镜观察到正常细胞线粒体为长杆状、棒状，三阴性乳腺癌细胞线粒体肿胀及基质空泡样。Western blot结果显示，线粒体编码的细胞色素C氧化酶I蛋白存在于提取的线粒体中，线粒体中热休克蛋白60的含量高于细胞质。多模式微孔板检测仪结果显示，提取的线粒体JC-1聚合物/单体为1.67±0.06，高于对照组（0.35±0.04， ＜0.001）。线粒体移植后，12、24、96 h在LTT细胞中可观察到外源性线粒体。CCK-8实验结果显示，在移植48 h后，LTT细胞 值为0.27±0.13，低于对照组（0.62±0.36， =0.023）。线粒体移植120 h时，LTT细胞 值仍低于对照组（均 ＜0.01）。经线粒体移植处理的LTT细胞形成的克隆细胞数为（21.33±7.31）个，低于对照组（35.22±13.59， =0.016）。流式细胞术结果显示，线粒体移植24 h后，LTT细胞早期凋亡比例为（30.07±2.15）%，高于对照组［（2.07±1.58）%， ＜0.001］，在MDA-MB-468细胞中，早期凋亡比例是（24.47±5.22）%，高于对照组［（7.83±2.06）%， =0.007］。此外，细胞成球实验中，线粒体移植的LTT细胞成球数量为（46.25±5.40）个，低于对照组［（62.58±6.43）个， ＜0.001］。 结论 正常线粒体可以通过共培养方式进入到三阴性乳腺癌细胞中，抑制三阴性乳腺癌细胞增殖和干性，促进三阴性乳腺癌细胞凋亡。

来源：2024年第09期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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