中华肿瘤杂志

作者：邢晶,陈丽萍,俞万钧

单位：宁波大学医学部，宁波　315000

关键词：肺肿瘤;非小细胞肺癌;circEZH2;外泌体;成纤维细胞;核因子κB

基金：宁波市自然科学基金E2022J032

目的 探讨非小细胞肺癌来源外泌体环状RNA hsa_circ_0006357（circEZH2）对人肺成纤维细胞（MRC-5细胞）的激活影响及其作用机制。方法 应用Western blot检测外泌体分子标志物，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和细胞侵袭实验检测肺腺癌来源外泌体对MRC-5细胞活化的影响。通过高通量测序对肺腺癌患者血清（2023年9月于宁波大学附属人民医院收集）外泌体进行circRNA分析，并通过RT-qPCR检测肺腺癌患者血清外泌体中circEZH2 mRNA的水平。细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、RT-qPCR、细胞免疫荧光实验和Western blot探究circEZH2对MRC-5活化的影响。通过荧光素酶报告基因、免疫荧光实验和Western blot分析circEZH2对miR-495-3p/肿瘤蛋白D52（TPD52）轴和核因子κB（NF-κB）通路的调控作用。结果 非小细胞肺癌来源外泌体促进了MRC-5细胞侵袭能力提升［与正常人支气管上皮细胞来源外泌体共培养细胞侵袭数为（42±5）个，与非小细胞肺癌细胞（SPC-A1、H1299、A549细胞）外泌体共培养细胞侵袭数为（246±7）个、（89±4）个、（69±14）个］，成纤维细胞活化标志物［α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（FAP）］和细胞促炎基因［白细胞介素6（IL-6）、IL-8］的表达升高（均 ＜0.05）。非小细胞肺癌患者血清外泌体中circEZH2 mRNA的表达水平增加（ ＜0.01）。非小细胞肺癌细胞来源外泌体与MRC-5细胞共培养促进了circEZH2表达（ ＜0.05）。在功能上，过表达circEZH2促进了MRC-5细胞迁移和侵袭［细胞迁移率分别为（30.81±2.54）%和（60.29±8.34）%，细胞侵袭数分别为（48.00±13.58）个和（115.00±9.50）个，均 ＜0.05］。RT-qPCR、western blot和免疫荧光检测结果显示，过表达circEZH2后，MRC-5细胞促炎因子IL-6、IL-8的mRNA和蛋白水平增加（ ＜0.05），成纤维细胞活化标志物α-SMA、FAP蛋白表达增加（ ＜0.05）。在机制上，circEZH2可能作为ceRNA调节miR-495-3p，促进TPD52表达，同时激活NF-κB通路促进MRC-5活化。 结论 非小细胞肺癌细胞来源外泌体circEZH2可能通过miR-495-3p/TPD52轴激活NF-κB通路促进成纤维细胞活化。

来源：2024年第12期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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