中华肿瘤杂志

作者：闫锐,梁紫葳,刘贺书,葛洋,安广宇

关键词：胰腺肿瘤;双肾上腺素皮质样激酶1;Hippo通路;迁移;侵袭;增殖

基金：北京市自然科学基金面上项目\u003C\u002Ffunding-source\u003E\u003Caward-id\u003E7232064

目的 探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)在胰腺癌中促进细胞迁移、侵袭与增殖的分子机制。方法 基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库与基因型-组织表达(GTEx)数据库，分析DCLK1与Hippo通路的相关性并采用胰腺癌组织芯片荧光染色进一步证实。细胞水平上，通过细胞爬片免疫荧光染色以及Western blot实验验证DCLK1对Hippo通路下游效应分子yes相关蛋白1(YAP1)是否具有调控作用，实时荧光定量聚合酶链反应分析YAP1结合转录因子TEA-DNA结合蛋白(TEAD)以及下游促恶性行为分子CYR61、EDN1、AREG、CTGF的表达。利用Hippo通路抑制剂Verteporfin处理细胞，采用Transwell实验检测DCLK1过表达细胞的迁移、侵袭能力是否受到抑制，采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖指数的变化。结果 TCGA和GTEx数据库数据分析显示，胰腺癌组织中DCLK1和YAP1的表达水平高于癌旁正常组织(均<0.05)。相关性热图提示，DCLK1与YAP1所在的Hippo通路有关，其中LATS1(＝0.53)、LATS2(＝0.34)、MOB1B(＝0.40)等均与DCLK1表达呈正相关(均<0.05)。胰腺癌患者组织芯片经多色荧光染色显示，胰腺癌DCLK1高表达患者伴随YAP1表达上调。胰腺癌AsPC-1与PANC-1细胞中DCLK1呈低表达，过表达DCLK1可促进YAP1进入细胞核。过表达DCLK1上调YAP1结合转录因子TEAD的表达并增加下游促迁移、侵袭、增殖分子mRNA的表达。使用Hippo通路抑制剂Verteporfin则可降低DCLK1高表达介导的细胞迁移、侵袭、增殖能力增加。AsPC-1 DCLK1过表达细胞的迁移数为(68.33±7.09)个，Verteporfin处理后的细胞迁移数为(22.00±4.58)个，差异有统计学意义(<0.05)。PANC-1对照组细胞的迁移数为(37.00±6.00)个，DCLK1过表达细胞的迁移数为(65.66±8.73)个，Verteporfin处理后两组细胞迁移数为(19.66±3.05)个和(32.33±9.61)个，差异均有统计学意义(均<0.05)。DCLK1过表达胰腺癌细胞侵袭数高于DCLK1对照组细胞以及Verteporfin处理后的DCLK1过表达细胞(均<0.05)。实时无标记细胞分析实验证实DCLK1过表达的AsPC-1细胞增殖指数为0.66±0.04，高于AsPC-1对照细胞的增殖指数(0.38±0.01，<0.05)，高于Verteporfin处理后的DCLK1过表达AsPC1细胞(0.05±0.03，<0.05)。而PANC-1 DCLK1过表达细胞的增殖指数为0.77±0.04，高于Verteporfin处理后的DCLK1过表达PANC1细胞(0.14±0.05，<0.05)。结论 DCLK1与Hippo通路显著相关且通过激活Hippo通路促进胰腺癌细胞迁移、侵袭与增殖。

来源：2023年第07期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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