中华肿瘤杂志

作者：田君,王宁,王琛,吴大鹏,王晨辉,丁肖杰,王玙珂

关键词：宫颈肿瘤;hsa_circ_0000392;miR－145－5p;CT10激酶调节子样蛋白;细胞外调节蛋白激酶信号通路;放疗敏感性

基金：2018年河南省科技攻关项目E2020086

目的 探讨hsa_circ_0000392(circ_0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法 收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织，根据患者对放射治疗的反应，将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ_0000392、miR－145－5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ_0000392、miR－145－5p mimic、miR－145－5p inhibitor、pcDNA 3.1－CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞，细胞经辐射诱导后，采用克隆形成实验检测细胞存活能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测Bax和Bcl－2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p－ERK) 1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000392、miR－145－5p和CRKL之间的靶向关系。裸鼠成瘤实验观察circ_0000392对宫颈癌体内放疗敏感性的影响。结果 circ_0000392和CRKL在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中均呈高表达，miR－145－5p在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中呈低表达(均 <0.05)。si－circ_0000392#1+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(78.67±10.97)个和(71.00±9.54)个，均低于si－Ctrl+6 Gy组[分别为(176.00±22.27)个和(158.33±17.56)个，均 <0.05]，细胞凋亡率分别为(41.55±3.40)%和(31.41±3.29)%，均高于si－Ctrl+6 Gy组[分别为(15.91±1.37)%和(13.70±1.89)%，均 <0.05]，si－circ_0000392#1+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于si－Ctrl+6 Gy组，Bcl2蛋白表达水平低于si－Ctrl+6 Gy组(均 <0.05)。si－circ_0000392#1+miR－145－5p inhibitor+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(171.33±25.01)个和(137.00±21.66)个，均高于si－circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(84.67±17.79)个和(71.00±11.00)个，均 <0.05]，细胞凋亡率分别为(17.41±2.58)%和(15.96±1.25)%，均低于si－circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(40.29±2.92)%和(30.82±2.34)%，均 <0.05]，si－circ_0000392#1+miR－145－5p inhibitor+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于si－circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组，Bcl2蛋白表达水平高于si－circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组(均 <0.05)。circ_0000392能够与miR－145－5p靶向结合，而CRKL是miR－145－5p的下游靶基因。miR－145－5p mimic+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(74.33±10.02)个和(66.00±12.17)个，均低于mimic NC+6 Gy组[分别为(197.67±17.21)个和(157.67±11.59)个，均 <0.05]，细胞凋亡率分别为(45.58±2.16)%和(32.10±3.55)%，均高于mimic NC+6 Gy组[分别为(15.85±2.45)%和(13.99±1.69)%，均 <0.05]，miR－145－5p mimic+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于mimic NC+6 Gy组，Bcl2蛋白表达水平低于mimic NC+6 Gy组(均 <0.05)。miR－145－5p mimic+pcDNA－CRKL+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(158.00±15.88)个和(122.33±13.65)个，均高于miR－145－5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(71.33±8.02)个和(65.67±12.22)个，均 <0.05]，细胞凋亡率分别为(19.50±3.45)%和(17.04±0.94)%，均低于miR－145－5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(44.33±2.36)%和(32.05±2.76)%，均 <0.05]，miR－145－5p mimic+pcDNA－CRKL+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于miR－145－5p mimic+pcDNA组+6 Gy组，Bcl2蛋白表达水平高于miR－145－5p mimic+pcDNA组+6 Gy组(均 <0.05)。sh－circ_0000392组小鼠肿瘤体积较小，肿瘤重量降低(均 <0.05)。小鼠移植瘤组织中circ_0000392、miR－145－5p、CRKL mRNA相对表达水平降低减少，CRKL、Bcl－2和p－ERK1/2蛋白相对表达水平降低，Bax蛋白相对表达水平升高(均 <0.05)。 结论 circ_0000392可增强宫颈癌细胞的放疗敏感性，其作用机制可能与靶向miR－145－5p调控CRKL/ERK信号通路有关。

来源：2023年第10期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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