中华肿瘤杂志

作者：陈雪雷,葛菲,万梦琪,齐世美,戚之琳

关键词：胃肿瘤;乳酸;高迁移率族蛋白盒1;核转位;Akt

基金：安徽高校自然科学研究项目重大项目EKJ2020ZD54、KJ2019ZD31

目的 探讨乳酸诱导胃癌细胞高迁移率族蛋白盒1(HMGB1)释放的分子机制。方法 将胃癌HGC-27细胞分为对照组和乳酸处理6 h组，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中HMGB1的水平，激光共聚焦和核质分离实验分别检测HMGB1的胞内定位及核转位，免疫共沉淀检测HMGB1磷酸化和乙酰化，Western blot检测Akt和蛋白激酶C的磷酸化。以Akt抑制剂LY294002与乳酸联合作用HGC-27细胞后，采用免疫共沉淀和Western blot分别检测HMGB1和Akt的磷酸化，激光共聚焦检测HMGB1的胞内定位，EdU实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的迁移能力。将HGC-27细胞注射于BALB/C裸鼠腋部皮下建立移植瘤模型。乳酸组小鼠隔天腹腔注射乳酸(0.2 g/kg)，对照组小鼠隔天腹腔注射等量PBS，连续20 d。ELISA法检测裸鼠内眦静脉血HMGB1含量，免疫共沉淀和Western blot检测肿瘤组织中HMGB1和Akt的磷酸化。结果 乳酸作用6和12 h，HMGB1的释放量分别为(2 995.00±660.91)pg/ml和(696.33±22.03)pg/ml，均高于对照组[(485.00±105.83)pg/ml， 值分别为<0.001和0.028]。乳酸处理6 h后，HGC-27细胞的细胞质中HMGB1蛋白的相对表达量为1.13±0.09，高于对照组(0.83±0.07， ＝0.001)，而细胞核中HMGB1的相对表达量为0.79±0.06，低于对照组(1.07±0.06， ＝0.007)；HMGB1的磷酸化水平达1.41±0.09，高于对照组(0.97±0.10， ＝0.031)；Akt的磷酸化水平为11.16±0.06，高于对照组(0.91±0.022， ＝0.002)。抑制Akt活化后，乳酸诱导的HMGB1磷酸化水平降低，HMGB1核转位明显减少，细胞增殖和迁移能力亦下降。体内实验显示，乳酸组小鼠外周血中HMGB1的含量为(1 280.70±389.66)pg/ml，高于对照组[(595.11±44.75)pg/ml， ＝0.008]，肿瘤组织中HMGB1和Akt的磷酸化水平明显增强。 结论 乳酸通过激活Akt信号通路增强胃癌细胞中HMGB1的磷酸化，促进HMGB1释放。

来源：2023年第11期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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