中华肿瘤杂志

作者：孙培胜,高正杰,范龙鑫,刘亚飞,陈炳合,穆淑真,闫争强

关键词：胃肿瘤;Th9细胞;CD8 T细胞;抗肿瘤

目的 探讨辅助性T细胞9(Th9)细胞和白细胞介素9(IL-9)在胃癌患者中的水平，评估Th9/IL-9对胃癌患者抗肿瘤免疫应答的调控作用。方法 纳入2018年10月至2019年8月在新乡医学院第一附属医院行手术治疗的胃癌患者34例，同期健康体检者20例。采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)，从手术切除的胃癌组织分离肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)和自体胃癌细胞，分选PBMCs和TILs中的CD4 T细胞、CD8 T细胞和CD4 CCR4 CCR6 CXCR3 细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9水平，流式细胞术检测PBMCs和TILs中CD3 CD4 IL-9 Th9细胞比例，实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-9和转录因子富嘌呤核酸结合蛋白1(PU.1) mRNA的相对表达量。以重组人IL-9刺激胃癌患者PBMCs和TILs，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖，Western blot法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)和STAT6磷酸化，ELISA法检测细胞因子分泌。以重组人IL-9刺激胃癌患者TILs分选的CD8 T细胞，建立CD8 T细胞与自体胃癌细胞的直接接触与间接接触共培养系统，通过检测乳酸脱氢酶(LDH)水平计算靶细胞死亡比例，ELISA法检测γ-干扰素(γ-IFN)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。CD4 CCR4 CCR6 CXCR3 细胞、CD8 T细胞与自体胃癌细胞共培养，加入抗IL-9中和抗体，检测靶细胞死亡比例。 结果 对照组PBMCs和胃癌组PBMCs中CD3 CD4 IL-9 Th9细胞比例分别为(1.21±0.25)%和(1.14±0.19)%，差异无统计学意义( ＝0.280)。胃癌组TILs中CD3 CD4 IL-9 Th9细胞比例为(2.30±0.55)%，高于对照组PBMCs和胃癌组PBMCs(均 0.05)，但可提高STAT6的磷酸化水平，促进TILs分泌γ-IFN、IL-17和IL-22(均 0.05)。在直接接触共培养系统中，CD4 CCR4 CCR6 CXCR3 细胞+CD8 T细胞+胃癌细胞组的靶细胞死亡比例为(22.01±3.05)%，γ-IFN水平为(104.5±12.84)pg/ml，均高于CD8 T细胞+胃癌细胞组[分别为(16.08±2.61)%和(76.45±8.56)pg/ml，均 <0.01]，但CD4 CCR4 CCR6 CXCR3 细胞+CD8 T细胞+胃癌细胞+抗IL-9中和抗体组的靶细胞死亡比例为(14.47±3.14)%，γ-IFN水平为(70.45±19.43)pg/ml，均低于CD4 CCR4 CCR6 CXCR3 细胞+CD8 T细胞+胃癌细胞组(均 <0.01)。 结论 肿瘤浸润性Th9细胞及其分泌的IL-9可促进胃癌患者CD8 T细胞活性，增强抗肿瘤免疫应答。

来源：2022年第11期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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