中华肿瘤杂志

作者：何兰,罗晶婧,周芳亮,范婧莹,史红健,何迎春,蒋益兰

关键词：鼻咽肿瘤;干细胞;增殖;侵袭;CD44;Ras信号通路

基金：国家自然科学基金面上项目E81874408、81573721

目的 探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征，以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法 采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖，细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况，Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力，细胞黏附实验观察细胞贴壁情况，Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平，采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果 接种后24、48和72 h，鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均 <0.05)。细胞种植14 d后，CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%，高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%， <0.01]；5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%，亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%， <0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野，是CNE2细胞的3.97倍( <0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野，是5-8F细胞的3.07倍( <0.01)。接种后3 h，CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%；接种后6 h，分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均 <0.01)。接种后3 h，5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%；接种后6 h，分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均 <0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比，鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均 <0.01)，E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均 <0.01)，磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均 <0.01)。相关分析显示，CNE2细胞与CNE2-SC细胞中，5-8F细胞与5-8F-SC细胞中，CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关( ＝0.985， ＝0.002； ＝0.962， ＝0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后，人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低，p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均 <0.01)。 结论 相对于来源鼻咽癌细胞，鼻咽癌干细胞增殖能力降低，但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强，可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。

来源：2021年第02期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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