中华肿瘤杂志

作者：赵宏峰,娄萌,毕民平,杨小伟,胡鹏蕴,刘佳林

关键词：肝肿瘤;miR-369-3p;α-辅肌动蛋白4;增殖;凋亡

基金：国家自然科学基金E81572939

目的 探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用，Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果 肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04，低于癌旁组织(1.00±0.08, <0.001)；ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29，高于癌旁组织(1.01±0.09, <0.001)；ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06，高于癌旁组织(0.25±0.03， <0.001)。与miR-NC组细胞比较，miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11， <0.001)，G 期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%， <0.001]，S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%， <0.001)]，细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)% , <0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均 <0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量升高(均 <0.001)。与si-NC组比较，抑制ACTN4的表达后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12， <0.001)，G 期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%， <0.001]，S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%， <0.001]，细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%， <0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均 <0.001)，p21和Bax蛋白水平升高(均 <0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较，过表达ACTN4后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06， <0.001)，G 期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%， <0.001]，S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%， <0.001]，细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%, <0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均 <0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量降低(均 <0.001)。 结论 miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G 期，抑制肝癌细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡。

来源：2021年第11期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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