中华肿瘤杂志

作者：朱李茹,封建立,刘晓吉,王军梅

关键词：肝细胞癌;长链非编码RNA HULC;微小RNA29;细胞增殖

基金：重庆市自然科学基金Ecstc2012jjA10147

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC通过下调微小RNA－29(miR－29)的表达促进肝细胞癌(HCC)细胞增殖的作用及分子机制。方法 运用实时荧光定量PCR法检测HCC组织和细胞中HULC和miR－29的表达水平，并进行相关性分析。HCC细胞转染HULC过表达质粒或以小干扰RNA(siRNA)敲低HULC的表达，以实时荧光定量PCR检测miR－29和靶基因SET结构域分支1(SETDB1)的表达水平。通过生物信息学预测HULC序列上存在的miR－29结合位点，构建报告基因质粒与miR－29模拟物、miR－29抑制物共转染HCC细胞，通过双荧光素酶报告基因实验验证HULC靶向调控miR－29的分子机制。以细胞计数盒8(CCK－8)法检测miR－29对HULC的促HCC细胞增殖作用的影响。以实时荧光定量PCR法检测Ki－67的表达。建立Hep3B细胞移植瘤模型，瘤内注射miR－29模拟物、miR－29抑制物、miR－29阴性对照，观察肿瘤体积。采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织中肿瘤增殖抗原Ki－67的表达。结果 与癌旁组织和正常肝细胞比较，HULC在HCC组织和HCC细胞中均呈高表达( <0.01)，而miR－29均呈低表达( <0.01)，HULC和miR－29在HCC组织( ＝－0.754， <0.01)和HCC细胞( ＝－0.865， <0.05)中的表达均呈负相关。与空白对照组比较，过表达HULC组Huh7细胞中miR－29表达明显降低，而miR－29靶基因SETDB1 mRNA的表达升高( <0.01)，si－HULC组Hep3B细胞中miR－29表达明显升高，而miR－29靶基因SETDB1 mRNA的表达降低( <0.01)。miR－29模拟物可显著抑制转染psi－HULC－WT质粒组但不能抑制转染突变(psi－HULC－Mut)组Hep3B细胞的荧光素酶活性，而miR－29抑制物可拮抗miR－29模拟物对psi－HULC－WT荧光素酶活性的抑制作用( <0.01)。与对照组比较，miR－29模拟物组Huh7细胞的增殖能力明显减弱。处理24、48和72 h后，HULC过表达组Huh7细胞的增殖率分别为(43.87±3.82)%、(83.45±7.46)%和(123.34±8.67)%，与对照组[分别为(13.45±1.77)%、(23.54±1.37)%和(38.21±2.09)%]比较，差异有统计学意义( <0.05)。处理48和72 h后，转染miR－29模拟物组Huh7细胞的增殖率分别为(57.10±1.94)%和(73.76±3.46)%，与对照组[分别为(83.45±7.46)%和(123.34±8.67)%]比较，差异有统计学意义( <0.05)。处理48和72 h后，转染miR－29模拟物＋miR－29抑制物组Huh7细胞的增殖率分别为(76.45±3.24)%和(89.37±4.37)%，与对照组[分别为(57.10±1.94)%和(73.76±3.46)%]比较，差异有统计学意义( <0.05)。与对照组比较，转染48 h，转染miR－29模拟物Huh7细胞中Ki－67 mRNA的表达明显受到抑制( <0.01)。转染miR－29抑制物Huh7细胞中Ki－67 mRNA的表达升高( <0.01)。对照组、miR－29模拟物组和miR－29模拟物＋miR－29抑制物组裸鼠移植瘤的肿瘤体积分别为(504.0±19.6)mm 、(310.0±24.3)mm 和(483.7±21.2)mm 。与对照组比较，miR－29模拟物组的裸鼠成瘤能力明显降低( <0.01)。与miR－29模拟物组比较，miR－29模拟物＋miR－29抑制物组裸鼠成瘤能力增强( <0.01)。对照组、miR－29模拟物组、miR－29模拟物＋miR－29抑制物组荷瘤鼠肿瘤组织中Ki－67蛋白的吸光度值分别为0.65±0.08、0.36±0.07、0.56±0.06。与对照组比较，miR－29模拟物组Ki－67蛋白表达量明显降低( <0.01)。与miR－29模拟物组比较，miR－29模拟物＋miR－29抑制物组Ki－67蛋白表达量升高( <0.01)。 结论 lncRNA HULC通过分子吸附miR－29、并下调miR－29的表达促进HCC细胞增殖。HULC下调miR－29表达可能是其参与促进HCC生长的新机制。

来源：2019年第9期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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