中华肿瘤杂志

作者：董向阳,李文静,翟波

关键词：肺肿瘤;TMPO基因;细胞增殖;细胞凋亡;Notch1/mTOR信号通路

基金：河南省科技攻关计划项目E162102310224

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)抑制胸腺生成素(TMPO)基因的表达对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用脂质体转染法将TMPO siRNA转染至人肺癌A549细胞，将转染siRNA control作为阴性对照组。转染后48 h，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot检测转染后细胞中TMPO的表达水平，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞周期和细胞的凋亡情况，Western blot检测细胞中PCNA、cleaved caspase-3、Notch1和mTOR的表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染组细胞中TMPO mRNA的表达水平分别为1.01±0.11、0.99±0.10和0.36±0.04。Western blot检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染组细胞中TMPO蛋白的表达水平分别为0.27±0.02、0.29±0.03和0.08±0.10；转染组细胞中TMPO mRNA和蛋白的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(均 <0.05)。MTT检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染组细胞在转染24 h时的吸光度( )值分别为0.35±0.04、0.37±0.04和0.34±0.03，转染48 h时 值分别为0.47±0.06、0.46±0.08和0.37±0.04，转染72 h时 值分别为0.75±0.08、0.73±0.07和0.49±0.05，转染96 h时 值分别为1.09±0.07、1.06±0.08和0.56±0.06；转染组细胞在转染48、72、96 h的 值均低于空白对照组和阴性对照组(均 <0.05)。流式细胞术检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染组中G /G 期细胞比例分别为(62.55±2.03)%、(61.24±3.15)%和(47.35±2.44)%，S期细胞比例分别为(17.12±1.31)%、(17.70±2.01)%和(20.81±2.06)%，G /M期细胞比例分别为(20.33±1.43)%、(21.06±1.52)%和(31.84±2.76)%，转染组G /G 期细胞比例均低于空白对照组和阴性对照组(均 <0.05)，G /M期细胞比例均高于空白对照组和阴性对照组(均 <0.05)。转染组细胞的凋亡率为(34.10±2.69)%，明显高于空白对照组[(2.96±0.03)%]和阴性对照组[(3.01±0.04)%，均 <0.05]。Western blot检测结果显示，转染后A549细胞中PCNA、Notch1和mTOR蛋白的表达下调，cleaved caspase-3蛋白的表达上调。 结论 抑制TMPO基因的表达能够显著抑制肺癌A549细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制与抑制Notch1/mTOR信号通路激活有关。

来源：2019年第10期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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