中华肿瘤杂志

作者：樊红莲,刘明珠,闵静婷,李红俊,杨小淮,李永海,李正红

关键词：肺肿瘤;动物模型;荧光素酶;近红外蛋白;活体成像

基金：国家自然科学基金E81472656

目的 建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型。方法 采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体，经酶切测序验证后，制备慢病毒，感染肺癌A549细胞。嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增，荧光显微镜下观察Luc和iRFP的表达，免疫荧光检测细胞表面c-Met蛋白的表达。将A549和mA549细胞分别接种至裸鼠皮下，每组6只，采用活体成像技术观察瘤体生长和荧光表达情况，HE染色和免疫组化染色评估成瘤状况。结果 成功构建了稳定表达Luc和iRFP的mA549细胞系。荧光显微镜下观察到mA549细胞中iRFP与Luc成功表达。免疫荧光检测显示，A549细胞和mA549细胞均可表达c-Met蛋白。mA549细胞接种裸鼠后，模型生长周期适中，成瘤率为100%；mA549细胞移植瘤的生长趋势与A549细胞移植瘤无明显差异( >0.05)。HE染色显示，mA549与A549细胞移植瘤的细胞形态和组织结构相同。免疫组化染色显示，A549和mA549细胞移植瘤均表达c-Met蛋白。 结论 成功构建了稳定的、可实时监测的iRFP-Luc-A549肺癌细胞裸鼠模型。

来源：2019年第11期

《中华肿瘤》期刊编辑部

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